Test rápido enzimático para la determinación de alcohol

Lezcano Nieto, Ester
Sanz Vicente, Isabel (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2021
Departamento de Química Analítica, Área de Química Analítica

Graduado en Química

Resumen: Se pretende desarrollar un método analítico para la determinación de etanol de forma
rápida en soportes de celulosa.
En primer lugar, se estudia mediante fluorescencia la oxidación de etanol a acetaldehído
mediante la enzima ADH, utilizando NAD+
como cofactor. El seguimiento de esta reacción
se realiza a las longitudes de onda de absorción y fluorescencia del NADH, 340 y 450nm
respectivamente. Con este método se ha conseguido un rango lineal muy bajo.
Para aumentar el rango lineal, se implanta una segunda reacción enzimática. Se trata de
una reacción indicadora en la cual, debido a la enzima diaforasa se oxida el NADH
generado en la reacción anterior. A su vez, se produce la reducción de un colorante
produciéndose así un compuesto coloreado. Esta reacción se estudia a la longitud de onda
de absorción del colorante (490nm).
Una vez optimizado el método analítico para la determinación de etanol en disolución y
comprobado que es posible utilizar esta metodología para el desarrollo de un biosensor
enzimático, se han dado los primeros pasos en la construcción de un soporte sólido para la
determinación de etanol de forma rápida. Para ello, se han inmovilizado el colorante, el
cofactor NAD y las enzimas ADH y diaforasa en soportes sólidos de celulosa.
Se ha comprobado que pueden observarse diferentes señales variando parámetros como
pH, concentración de ADH y que dependen de la concentración de etanol.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado