| TAZ-TFG-2022-2854 |
Análisis de la tasa de traducción mitocondrial de fibroblastos embrionarios de ratón con hepatoencefalopatía COXPD1
Cáseda Moreno, Irene
Bayona Bafaluy, María Pilar (dir.)
Universidad de Zaragoza,
CIEN,
2022
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular,
Graduado en Biotecnología
Resumen: La hepatoencefalopatía por deficiencia combinada de fosforilación oxidativa de tipo 1
(COXPD1) es una enfermedad mitocondrial causada por mutaciones en el gen GFM1 que
codifica el factor de elongación mitocondrial G1 (EFG1). El estudio de diversos pacientes
reveló una alteración en la secuencia de GFM1, un cambio de aminoácidos en la posición
p.671 de Arginina a Citosina (p.R671C).
Se generaron modelos permitieran estudiar la enfermedad, ratones portadores de la
mutación p.R671C en homocigosis (Gfm1R671C/R671C). Sin embargo, su leve fenotipo condujo
al intento fallido de obtener modelos knock-out para Gfm1, pero estos ratones sufrían
letalidad embrionaria con el alelo en homocigosis. Como alternativa se generaron ratones
heterocigotos con uno de sus alelos knock-out y otro con la mutación p.R671C
(Gfm1-/R671C). Los fibroblastos de estas líneas de ratones se estudiaron en este trabajo.
El análisis de los fibroblastos embrionarios ratón (MEFs) reveló niveles de EFG1 reducidos
en la línea Gfm1-/R671C. Sin embargo, los niveles de EFG1 en la línea con un fenotipo más
leve (Gfm1R671C/R671C) incrementaron ligeramente. Las dos líneas celulares con Gfm1
mutado mostraron reducción en los niveles de COI, subunidad I del complejo IV o
Citocromo c oxidasa de la cadena de fosforilación oxidativa. Esta expresión disminuida
pudo observarse en el análisis mediante Western Blot e inmunocitoquímica. COI, proteína
del sistema OXPHOS, es codificada por el DNA mitocondrial y sintetizada en los ribosomas
mitocondriales, proceso en el que EFG1, factor de elongación tiene un papel fundamental.
No se logró medir la tasa de traducción mitocondrial con la química click. Aunque se
observó marcaje, es necesario optimizar el protocolo para las líneas celulares en estudio.
(COXPD1) es una enfermedad mitocondrial causada por mutaciones en el gen GFM1 que
codifica el factor de elongación mitocondrial G1 (EFG1). El estudio de diversos pacientes
reveló una alteración en la secuencia de GFM1, un cambio de aminoácidos en la posición
p.671 de Arginina a Citosina (p.R671C).
Se generaron modelos permitieran estudiar la enfermedad, ratones portadores de la
mutación p.R671C en homocigosis (Gfm1R671C/R671C). Sin embargo, su leve fenotipo condujo
al intento fallido de obtener modelos knock-out para Gfm1, pero estos ratones sufrían
letalidad embrionaria con el alelo en homocigosis. Como alternativa se generaron ratones
heterocigotos con uno de sus alelos knock-out y otro con la mutación p.R671C
(Gfm1-/R671C). Los fibroblastos de estas líneas de ratones se estudiaron en este trabajo.
El análisis de los fibroblastos embrionarios ratón (MEFs) reveló niveles de EFG1 reducidos
en la línea Gfm1-/R671C. Sin embargo, los niveles de EFG1 en la línea con un fenotipo más
leve (Gfm1R671C/R671C) incrementaron ligeramente. Las dos líneas celulares con Gfm1
mutado mostraron reducción en los niveles de COI, subunidad I del complejo IV o
Citocromo c oxidasa de la cadena de fosforilación oxidativa. Esta expresión disminuida
pudo observarse en el análisis mediante Western Blot e inmunocitoquímica. COI, proteína
del sistema OXPHOS, es codificada por el DNA mitocondrial y sintetizada en los ribosomas
mitocondriales, proceso en el que EFG1, factor de elongación tiene un papel fundamental.
No se logró medir la tasa de traducción mitocondrial con la química click. Aunque se
observó marcaje, es necesario optimizar el protocolo para las líneas celulares en estudio.
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado
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