TAZ-PFC-2012-217


Desarrollo de un método de referencia basado en el método isas y análisis de imágenes para la evaluación morofométrica del acrosoma del espermatozoide en la especie ovina

Castillo Lalaguna, Virginia
Yániz Pérez de Albéniz, Jesús (dir.)

Universidad de Zaragoza, EPSHUES, 2012
Producción Animal y Ciencia de los Alimentos department, Producción Animal area

Ingeniero Técnico Agrícola (Explotaciones Agropecuarias)

Abstract: El objetivo general del proyecto fue desarrollar un nuevo método asistido por ordenador para la evaluación morfométrica del acrosoma espermático en morueco. Los eyaculados se obtuvieron mediante vagina artificial de 10 machos adultos de la raza Rasa Aragonesa. Tras la recogida, se descartaron aquellas muestras con una movilidad menor del 70%. De cada muestra se tomaron cinco alícuotas para realizar los diferentes tratamientos: 1) lavado con agua destilada; 2) fijación y tinción con el kit de Hemacolor; 3) fijación y tinción con el kit de Spermblue; 4) fijación con 50% de metanol; y 5) fijación con 2% de glutaraldehído. Cada muestra se analizó por duplicado con el objetivo de 40 aumentos con y sin filtro de contraste de fases. Para cada variante se analizaron 200 espermatozoides. Para la evaluación de los parámetros morfomértricos se utilizó el programa ISAS®, que permite un análisis computerizado individual para cada espermatozoide. La utilización del filtro de contraste de fases, lejos de mejorar la calidad de las imágenes, provocó la aparición de artefactos, con la presencia de halos alrededor de los espermatozoides. Como consecuencia, la captura de las imágenes no fue tan precisa y el filtro modificó los parámetros morfométricos obtenidos, reduciendo las dimensiones de cabeza y acrosoma. Independientemente de la utilización del filtro, los grupos con peores resultados fueron los fijados con glutaraldehido y metanol, por debajo del 90% de espermatozoides correctamente analizados. En el grupo lavado con agua, la captura se situó en torno al 90%, mientras que la tinción de las muestras con Hemacolor o SpermBlue permitió mejorar la proporción de espermatozoides correctamente analizados. En las muestras fijadas con glutaraldehido o metanol se observó claramente la presencia de artefactos, que pudieron contribuir a una menor precisión en la captura. El tratamiento de las muestras tuvo un efecto significativo sobre todas las medidas morfométricas. Para la mayoría de los parámetros morfométricos primarios (área, perímetro, longitud y anchura de la cabeza)la relación entre tratamientos podría definirse de la siguiente manera: GLUT>HM>MET>SB>Lavado. Las únicas excepciones fueron la anchura de la cabeza (para la que el SB fue mayor que el MET) y la longitud, que fue similar entre el SB y el lavado. El tratamiento también tuvo un efecto claro sobre las dimensiones del acrosoma y la proporción de la cabeza ocupada por el mismo. Para el área del acrosoma la relación entre los distintos tratamientos fue muy parecida a la descrita para los parámetros primarios de la cabeza espermática, excepto que la relación entre el Hemacolor y el metanol se invirtió. Cuando estudiamos la proporción de la cabeza del espermatozoide cubierta por el acrosoma, la relación entre tratamientos fue la siguiente: SB>GLUT>MET>Lavado>HM. En conclusión, se ha desarrollado y estandarizado un nuevo método asistido por ordenador que permite por primera vez el estudio simultáneo de la cabeza y el acrosoma espermáticos en morueco.


Free keyword(s): espermatozoide ; acrosoma ; morueco ; isas ; morfometría
Tipo de Trabajo Académico: Proyecto Fin de Carrera
Notas: Resumen disponible también en inglés.

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