TAZ-TFM-2012-120


Efectos del ejercicio físico sobre la fluidez de sarcolema y mitocondría en rata Wistar

Lara Navarro, Emma María
García García, José Joaquín (dir.) ; Martínez Ballarín, Enrique (dir.)

Universidad de Zaragoza, MED, 2012

Máster Universitario en Iniciación a la Investigación en Medicina

Abstract: 1.Introducción. La expresión del ataque por radicales libres a los fosfolípidos de la membrana celular es el fenómeno de la peroxidación lipídica. Este proceso se inicia con la pérdida de átomos de hidrógeno de los restos acilo de los fosfolípidos, y con la formación de radicales peroxilo y alcoxilo, y lipoperóxidos, endoperóxidos e hidroperóxidos. A su vez, éstos inician una reacción en los fosfolípidos vecinos, propagando por toda la membrana la peroxidación, que sólo puede detenerse por el agotamiento del sustrato lipídico o la presencia de moléculas antioxidantes. La práctica de ejercicio físico incrementa el consumo de oxígeno (VO2) en la mitocondria muscular hasta 25 veces con respecto al reposo. Dillard y cols. (1978) demostraron por primera vez que el ejercicio físico aumentaba la peroxidación lipídica de las membranas celulares. Por otro lado, el ejercicio es un componente vital en el mantenimiento de la salud y retarda el desarrollo de algunas enfermedades crónicas. La ausencia de unos mecanismos adaptativos al aumento del daño oxidativo producido durante el ejercicio es quien determina el daño al ADN, proteínas y lípidos. La consecuencia de la peroxidación es la pérdida de fluidez en la membrana, que requiere un grado óptimo. Su alteración determina pérdida funcional e, incluso, muerte celular. El trabajo que desarrollará el solicitante tiene por objeto estudiar varios indicadores de lesión oxidativa en lípidos y proteínas, y observar cómo esto modifica la fluidez de membrana de las células existentes en cerebro, corazón, hígado y músculo de rata. 2. Metodología 2.1. Muestra. La investigación se realizó con ratas Wistar, machos, de 200-225 g de peso, divididas en grupos de 10, de forma que se les extraiga la muestra requerida al finalizar la prueba de esfuerzo. Unas fueron sacrificadas nada más finalizar la prueba, y otras tras haber pasado la noche en reposo. Asimismo, se obtuvo la muuestra de cada grupo de ratas en diferentes espacios temporales, control ejercicio agudo 7 días (basal) 1 mes (basal) 3 meses (basal) 2.2. Pruebas de esfuerzo. Antes de someter a las ratas a pruebas de esfuerzo, fué necesario determinar previamente su VO2max inicial. Para ello, se realizó una prueba de esfuerzo en rampa, utilizando un tapiz rodante con 25º de inclinación. Tras dejar que haga un calentamiento de 15 minutos, se efectuó un incremento de la velocidad del tapiz de 0,03 m/s cada 2 minutos. Realizaron ejercicio durante 2 horas al día y 5 días a la semana antes de iniciar el periodo de entrenamiento. Calentarón 20 minutos (40-50% del VO2max), y a continuación fueron sometidas a dos cargas de trabajo alternas: 8 minutos al 85-90% del VO2max (submáximo) y 2 minutos al 50-60% del mismo (moderado). 2.3. Métodos analíticos 2.3.1. Medición de la fluidez de la membrana. Las membranas se aislaron tras una serie de lavados en suero fisiológico y se hemolizaron utilizando un método basado en la centrifugación. La fluidez de las membranas se monitorizó por técnicas de espectroscopía de fluorescencia. 2.3.2 Cuantificación de proteínas totales. Las proteínas totales se determinaron por el método de Bradford . Este procedimiento analítico se basa en la adición de un colorante ácido, el reactivo de Bradford, a la suspensión de proteína problema y a continuación la medición en un espectrofotómetro a 595 nm.


Free keyword(s): fluidez de membrana ; ejercicio físico ; sarcolema ; mitocondria
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master

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