8913 Zaragoza Universidad de Zaragoza 2012 denied El autor no autoriza la difusión del texto completo de su obra 622354@celes.unizar.es mitocondria citoesqueleto filamentos intermedios proteína fluorescente oxidasa alternativa cadena de transporte electrónico patología mitocondrial patología neurodegenerativa infección vector lentiviral plásmido TAZ TFM CIEN Bayona Bafaluy, María Pilar dir. Fernández Silva, Patricio dir. Universidad de Zaragoza Bioquímica y Biología Molecular y Celular Bioquímica y Biología Molecular Relación entre los filamentos intermedios y la mitocondria Los filamentos intermedios son uno de los tres tipos de fibras que componen el citoesqueleto, junto con los microfilamentos y los microtúbulos. Se sabe que éstos últimos participan en el movimiento de las mitocondrias por el citoplasma, junto con proteínas motoras. A través de estudios y datos previos se ha relacionado a los filamentos intermedios de tipo III, y en concreto a la vimentina, con la dinámica mitocondrial, aunque apenas hay literatura al respecto.En el presente Trabajo de Fin de Máster se presenta una metodología empleada para tratar de elucidar si los filamentos intermedios son proteínas de localización mitocondrial. Si es así, sus genes podrían ser responsables de patologías neurodegenerativas que, hasta la fecha, tienen una etiología desconocida. A este efecto: 1) se evaluó la probabilidad que los diferentes filamentos intermedios presentan de entrar a mitocondria analizando su secuencia mediante programas bioinformáticos; 2) seguidamente se clonaron algunos filamentos intermedios que presentaban alta probabilidad de ser importados a mitocondria y se generaron constructos de fusión con proteínas reporteras como una oxidasa alternativa, o proteínas fluorescentes; 3) Por último, se generaron partículas lentivirales para inducir la expresión de las proteínas de fusión en células eucariotas en cultivo en monocapa y se inició el análisis de su posible efecto. La enzima oxidasa alternativa provee un método de selección metabólica en células carentes de DNA mitocondrial (denominadas ρ0), para determinar si la proteína cuya expresión se ha inducido en las células es capaz de entrar a la mitocondria. Los constructos con proteínas fluorescentes permitieron observar los filamentos intermedios mediante microscopía de fluorescencia y permitirán su análisis mediante videomicroscopía “in vivo” para evaluar si existe co-localización con la mitocondria. spa Virumbrales Muñoz, María TAZ-TFM-2012-747 Con la colaboración de la empresa Exopol. Máster en Biología Molecular y Celular http://zaguan.unizar.es/TAZ/CIEN/2012/8913/TAZ-TFM-2012-747.pdf 3677570 Memoria (spa)