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TAZ-TFM-2012-760

April y PoFut-2: estudio y caracterización de la unión a sus ligandos azucarados

Hernández, Cristina
Hurtado Guerrero, Ramón (dir.) ; Lira Navarrete, Erandi (dir.)

Universidad de Zaragoza, Facultad de Ciencias, 2012
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Bioquímica y Biología Molecular

Máster en Biología Molecular y Celular

Resumen: Este estudio se centra en dos proteínas de funcionalidades distintas, ambas vinculadas a carbohidratos: PoFUT2, glicosiltransferasa de inversión, cuya función es la o-fucosilación protéica, mediando la transferencia de fucosa desde GDP-fucosa a dominios TSR. La o-fucosilación es una modificación postraduccional implicada en diversas funciones del desarrollo. Resulta de gran relevancia discernir sus estructuras y mecanismo catalítico, aún desconocidas. En este estudio, se ha conseguido por primera vez la expresión de la proteína de C. elegans, obteniendo mutantes resistentes a la degradación producida por P. pastoris. Un protocolo de purificación ha permitido realizar posteriormente estudios de cristalografía, con los cuales vimos que la glicosilación presente en esta enzima no permite la formación de cristales que difracten llevándonos al diseño de nuevos mutantes. APRIL es un ligando de la familia TNF capaz de unir dos receptores BCMA y TACI. Tiene gran relevancia biológica al estar implicada en diversas enfermedades autoinmunes y promover la supervivencia y proliferación tumoral (cáncer de colon y tiroides), lo cual le hace un potencial blanco de acción de fármacos. Ninguno de los dos receptores median señales proliferativas, de ahí la importancia de encontrar un tercer receptor específico. Se ha descubierto que APRIL une proteoglicanos, aunque no se han determinado las características de esta unión. Este estudio evaluó los proteoglicanos afines a APRIL y las bases de la unión formada. Gracias a la construcción de un plásmido de APRIL con cola de histidinas en el C-terminal, se realizaron ensayos de unión y competitividad con diversos oligosacáridos concluyendo que el mínimo oligosacárido que se une a APRIL es dp18-heparina, que permitirá llevar a cabo futuros experimentos de co-cristalización. Además hemos podido ver que son las heparinas altamente sulfatadas y el dominio de heparansulfato, las moléculas que exhiben una fuerte unión a APRIL.


Palabra(s) clave (del autor): April ; PoFut-2
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master

El autor NO autoriza la consulta a texto completo


 

 Registro creado el 2012-09-04, última modificación el 2012-12-14


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