Universidad de Zaragoza Custodiado por la Biblioteca de la Universidad de Zaragoza Premis-plugin for CDSInvenio, developed by Miguel Martín Miguel Martín González 02408nmm 2200000 a 4500

2012-12-04

spa Albero Mena, Carmen Martínez Júlvez, Marta María http://zaguan.unizar.es/record/9018 La enzima FAD sintetasa (FADS) de procariotas es una enzima bifuncional que cataliza la conversión de Riboflavina (RF) (vitamina B2) a FMN y FAD, cofactores de las flavoproteínas. La FADS del patógeno C. ammoniagenes (CaFADS) es vital para la supervivencia de dicho microorganismo. Se ha resuelto la estructura tridimensional de esta enzima mediante cristalografía de rayos X que ha revelado la presencia de una estructura cuaternaria, dos trímeros que se ordenan en un hexámero. Cada monómero resulta plegado en dos módulos relacionados con cada una de las actividades: el dominio C-terminal donde tiene lugar la fosforilación de RF a FMN (actividad riboflavina quinasa, RFK)) y el dominio N-terminal, donde se cataliza la adenililación de FMN a FAD (actividad adenililtransferasa, FMNAT). Mediante experimentos de calorimetría y modelado con otras estructuras homólogas, se han localizado los sitios activos de unión de ATP y flavina en el dominio FMNAT y los sitios de unión de FMN y ADP-Mg2+ en el módulo RFK. Estos estudios arrojan evidencias a nivel molecular del mecanismo de síntesis de FMN y FAD en procariotas en los cuales el estado oligomérico de la FADS podría estar implicado en la regulación de la eficiencia catalítica de la enzima. Con el objeto de profundizar en la importancia del proceso de oligomerización en la actividad de la enzima CaFADS, se han generado especies mutantes de dicha enzima en las que se han reemplazado residuos de aminoácido situados en la superficie de interacción entre los monómeros del trímero porresiduos de distinta naturaleza. De esta manera se estudia el efecto que estas mutaciones provocan en la organización oligomérica de la CaFADS y con ello determinar la importancia del residuo correspondiente en el proceso de oligomerización. En este proyecto Máster se abordará la resolución estructural de las especies mutadas de la CaFADS generadas en las posiciones R66, F206, D298 y E301 mediante cristalografía de rayos X. Los datos de difracción de los que ya se dispone, se procesarán para obtener los mapas de densidad electrónica. Las estructuras que se obtengan a partir de ellos se refinarán de manera automática y manual hasta obtener las estructuras finales. Finalmente, se procederá a comparar dichas estructuras como monómeros y en asociación oligomérica con las correspondientes a la enzima nativa y discutir los efectos que los posibles cambios conformacionales debidos a las mutaciones pueden tener en la oligomerización. Además las estructuras aportarán datos importantes a la caracterización bioquímica y biofísica previa de las especies mutadas realizada mediante diferentes técnicas. info:eu-repo/semantics/closedAccess Fulltext access not authorized info:eu-repo/semantics/bachelorThesis info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf 2012-09-05 02408nmm 2200000 a 4500 9018 TAZ-TFM-2012-780 spa Albero Mena, Carmen Resolución estructural a partir de datos de difracción de rayos X de especies mutadas de la enzima FADS Zaragoza Universidad de Zaragoza 2012 denied La enzima FAD sintetasa (FADS) de procariotas es una enzima bifuncional que cataliza la conversión de Riboflavina (RF) (vitamina B2) a FMN y FAD, cofactores de las flavoproteínas. La FADS del patógeno C. ammoniagenes (CaFADS) es vital para la supervivencia de dicho microorganismo. Se ha resuelto la estructura tridimensional de esta enzima mediante cristalografía de rayos X que ha revelado la presencia de una estructura cuaternaria, dos trímeros que se ordenan en un hexámero. Cada monómero resulta plegado en dos módulos relacionados con cada una de las actividades: el dominio C-terminal donde tiene lugar la fosforilación de RF a FMN (actividad riboflavina quinasa, RFK)) y el dominio N-terminal, donde se cataliza la adenililación de FMN a FAD (actividad adenililtransferasa, FMNAT). Mediante experimentos de calorimetría y modelado con otras estructuras homólogas, se han localizado los sitios activos de unión de ATP y flavina en el dominio FMNAT y los sitios de unión de FMN y ADP-Mg2+ en el módulo RFK. Estos estudios arrojan evidencias a nivel molecular del mecanismo de síntesis de FMN y FAD en procariotas en los cuales el estado oligomérico de la FADS podría estar implicado en la regulación de la eficiencia catalítica de la enzima. Con el objeto de profundizar en la importancia del proceso de oligomerización en la actividad de la enzima CaFADS, se han generado especies mutantes de dicha enzima en las que se han reemplazado residuos de aminoácido situados en la superficie de interacción entre los monómeros del trímero porresiduos de distinta naturaleza. De esta manera se estudia el efecto que estas mutaciones provocan en la organización oligomérica de la CaFADS y con ello determinar la importancia del residuo correspondiente en el proceso de oligomerización. En este proyecto Máster se abordará la resolución estructural de las especies mutadas de la CaFADS generadas en las posiciones R66, F206, D298 y E301 mediante cristalografía de rayos X. Los datos de difracción de los que ya se dispone, se procesarán para obtener los mapas de densidad electrónica. Las estructuras que se obtengan a partir de ellos se refinarán de manera automática y manual hasta obtener las estructuras finales. Finalmente, se procederá a comparar dichas estructuras como monómeros y en asociación oligomérica con las correspondientes a la enzima nativa y discutir los efectos que los posibles cambios conformacionales debidos a las mutaciones pueden tener en la oligomerización. Además las estructuras aportarán datos importantes a la caracterización bioquímica y biofísica previa de las especies mutadas realizada mediante diferentes técnicas. Máster en Biología Molecular y Celular El autor no autoriza la difusión del texto completo de su obra Martínez Júlvez, Marta María dir. Universidad de Zaragoza 535642@celes.unizar.es 2112490 http://zaguan.unizar.es/TAZ/CIEN/2012/9018/TAZ-TFM-2012-780.pdf Memoria (spa) TAZ TFM CIEN URI http://zaguan.unizar.es/record/9018 SUPPORTED 0 MD5 http://zaguan.unizar.es/TAZ/CIEN/2012/9018/TAZ-TFM-2012-780.md5 4096 image/x.djvu 6 http://djvu.sourceforge.net/abstract.html DJVU/6 Profile information Lizardtech Document Express Enterprise 5.1 2011-01-19T11:29:27 URI http://zaguan.unizar.es/TAZ/CIEN/2012/9018/TAZ-TFM-2012-780.pdf disk Minimum View Print Visualization of DJVU requires specific software, like DjVu Browser Plugin URI http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0 URI http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0 license URI http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0 You are free to adapt, copy, transmite or distribute the work under the following conditions: (1) You must attribute the work in the manner specified by the author or licensor (but not in any way that suggests that they endorse you or your use of the work). (2) You may not use this work for commercial purposes (3) For any reuse or distribution, you must make clear to others the license terms of this work (4) Any of the above conditions can be waived if you get permission from the copyright holder (5) Nothing in this license impairs or restricts the author's moral rights This object is licensed under Creative Common Attribution-NonCommercial 3.0 (further details: http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/). Universidad de Zaragoza Automatizacion de Bibliotecas Edif. Matematicas, Pedro Cerbuna 12, 50009 Zaragoza auto.buz@unizar.es