| TAZ-TFG-2020-2079 |
Determinación de glicerofosfolípidos y esfingolípidos en muestras de interés biológico mediante Cromatografía en Capa Fina de Alta Eficacia acoplada a Espectrometría de Masas
Peñalosa Dominguez, Jaime Carlos
Cebolla Burillo, Vicente Luis (dir.) ; Jarne Lardiés, Carmen (dir.)
Vela Rodrigo, Jesús (ponente)
Universidad de Zaragoza,
CIEN,
2020
Departamento de Química Analítica, Área de Química Analítica
Graduado en Química
Resumen: En esta Memoria se ha llevado a cabo una revisión bibliográfica acerca del análisis de esfingolípidos (SL) y fosfolípidos (PL) en muestras biológicas complejas mediante Cromatografía en Capa Fina de Alta Eficacia (HPTLC)-densitometría acoplada directamente a Espectrometría de Masas, técnica que ha experimentado un desarrollo experimental importante en la última década.
Tras una introducción general a los lípidos estudiados y a las técnicas cromatográficas acopladas a MS (LC y GC), se han revisado los métodos de separación HPTLC de los SL y PL, las técnicas de densitometría de barrido (UV, Vis, FL) para su detección, y las técnicas de acoplamiento a MS utilizando ionización a presión atmosférica. Estas últimas, pueden dividirse fundamentalmente en técnicas basadas en la extracción-elución automatizada de la o las bandas separadas en la placa cromatográfica, con posterior identificación estructural mediante ESI-MS, MS/MS y en técnicas de desorción-ionización sobre la placa e ionización MALDI o DESI.
Cuando existen patrones adecuados, la densitometría permite la determinación cuantitativa de lípidos individuales, y la determinación semicuantitativa de las clases y subclases de SL y PL cuyos componentes pueden identificarse estructuralmente por MS. Esto se ha usado para obtener perfiles de SL y PL relacionados con el metabolismo celular, o para monitorizar el transporte de PL a través de membranas.
Muchos de estos problemas se habían realizado experimentalmente utilizando procedimientos manuales de rascado y aislamiento de la banda HPTLC para su caracterización. Estos requerían mucho tiempo, daban lugar a errores experimentales y eran ineficaces a la hora de procesar una alto número de muestras. A pesar del uso cada vez más frecuente de HPTLC-densitometría-MS por su rapidez y selectividad, las posibilidades de acoplamiento no se han explorado en profundidad.
Tras una introducción general a los lípidos estudiados y a las técnicas cromatográficas acopladas a MS (LC y GC), se han revisado los métodos de separación HPTLC de los SL y PL, las técnicas de densitometría de barrido (UV, Vis, FL) para su detección, y las técnicas de acoplamiento a MS utilizando ionización a presión atmosférica. Estas últimas, pueden dividirse fundamentalmente en técnicas basadas en la extracción-elución automatizada de la o las bandas separadas en la placa cromatográfica, con posterior identificación estructural mediante ESI-MS, MS/MS y en técnicas de desorción-ionización sobre la placa e ionización MALDI o DESI.
Cuando existen patrones adecuados, la densitometría permite la determinación cuantitativa de lípidos individuales, y la determinación semicuantitativa de las clases y subclases de SL y PL cuyos componentes pueden identificarse estructuralmente por MS. Esto se ha usado para obtener perfiles de SL y PL relacionados con el metabolismo celular, o para monitorizar el transporte de PL a través de membranas.
Muchos de estos problemas se habían realizado experimentalmente utilizando procedimientos manuales de rascado y aislamiento de la banda HPTLC para su caracterización. Estos requerían mucho tiempo, daban lugar a errores experimentales y eran ineficaces a la hora de procesar una alto número de muestras. A pesar del uso cada vez más frecuente de HPTLC-densitometría-MS por su rapidez y selectividad, las posibilidades de acoplamiento no se han explorado en profundidad.
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado
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