Desarrollo de un método óptico enzimático para la determinación de alcaloides tropánicos.

Lasso Fernández, Santiago
Sanz Vicente, Isabel (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2022

Graduado en Química

Resumen: Se pretende desarrollar un método analítico rápido para la determinación de alcaloides de tropano, concretamente atropina.
El inicio se basa en la oxidación alcalina de la atropina para obtener tropina por la acción de una disolución de NaOH 2M. Posteriormente, se estudia mediante absorción molecular la oxidación del grupo alcohol a una cetona de la molécula de tropina mediante la enzima Tropinona Reductasa, utilizando el NAD+ como cofactor. El seguimiento de esta reacción se realiza a la longitud de onda de 340 nm, el máximo de absorción del NADH, que es proporcional a la tropina.
Para aumentar el rango lineal, se acopla una segunda reacción enzimática. Se trata de una reacción colorimétrica en la cual, mediante la enzima diaforasa se oxida el NADH generado en la reacción anterior. A su vez, se produce la reducción de un colorante produciéndose así un compuesto con un color rojizo. Esta reacción se estudia a la longitud de onda de absorción del colorante, 490 nm, que es proporcional a la concentración de atropina.
Una vez optimizado el método analítico para la determinación de alcaloides de tropano en disolución, se realizan las primeras pruebas en muestras reales y se lleva a cabo el estudio del efecto matriz que conllevan las muestras de cereales para alimentación infantil más habituales.
Se obtiene un LD=7,10·10-7 M, un LQ= 2,37·10-6 M, un rango lineal desde el LQ hasta C= 1·10-4 M y una DSR=3,84%. Este es un primer paso para el estudio de la reacción en un soporte sólido para desarrollo de biosensores.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado