Estudio de un método espectrofotométrico para la determinación de aminas biógenas (diaminas) basado en su reacción enzimática con Putrescina Oxidasa y en la generación de nanopartículas de oro como método indicador

Calavia Vicente, Paula
Galbán Bernal, Francisco Javier (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2022
Departamento de Química Analítica, Área de Química Analítica

Graduado en Química

Resumen: Con este trabajo se pretende desarrollar un método enzimático para la determinación rápida y específica de la amina biógena putrescina basado en su reacción enzimática con Putrescina Oxidasa y en la generación de nanopartículas de oro como método indicador.
En primer lugar, se realiza la optimización de las condiciones de reacción; el pH al que se lleva a cabo la reacción, la temperatura, las concentraciones tanto de enzima como de Au (III) y el efecto de la concentración y/o fuerza iónica de la disolución amortiguadora. Tras la optimización, se obtienen parámetros analíticos como la incertidumbre que proporcionan el equipo y la reacción.
Para estos estudios se tienen en cuenta tanto la procedencia de la señal, como el procedimiento de formación de las nanopartículas por coalescencia de los nanoclusters de oro, estudiados por fluorescencia.
Se prepara una calibración para la determinación de putrescina a 60ºC, sobre una disolución amortiguadora de fosfatos a pH=7,5 y 0,1M, con una concentración 3,57·10-7M de PutOx y 1·10-3M de Au (III). En esta calibración se obtiene un polinomio cuadrático con un rango de trabajo desde 1·10-4M, hasta 8,5·10-4 M y una DSR% de 4,3% ([Put]=5·10-4M, n=6).
La combinación de la reacción con oro y otros metales como Platino o Paladio, no consiguió mejorar los resultados.
Finalmente, se estudia el efecto de las interferencias de aminas biógenas similares al analito como son: cadaverina, histamina y tiramina.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado