Desarrollo de un test colorimétrico para la determinación de alcaloides tropánicos

Moraru, Doria Elena
de Marcos Ruiz, Susana (dir.) ; Domínguez García, Mario (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2023
Química Analítica department, Química Analítica area

Graduado en Química

Abstract: El objetivo de este trabajo es el desarrollo de un método enzimático rápido para la determinación colorimétrica de toxinas de la familia de los alcaloides tropánicos mediante tiras reactivas. El estudio está basado en una reacción de desesterificación de la atropina obteniéndose tropina, seguida de una reacción enzimática en la que se obtiene tropinona y NADH, éste último presenta absorbancia molecular a 340 nm. Para obtener una señal colorimétrica que aparezca a una longitud de onda en el visible se acopla una reacción indicadora, en la que se produce la reducción de un colorante (INT) formándose formazan, un compuesto que presenta color rojizo y cuya concentración es la que se medirá proporcionando una señal de coordenadas RGB.
Esta determinación se lleva a cabo preparando soportes de celulosa sobre los que se adicionan los distintos reactivos, por ello se ha optimizado tanto el soporte sólido de las tiras reactivas como las condiciones de inmovilización de los reactivos, utilizando como parámetro analítico Go-G, donde G es el valor de la coordenada de la muestra y Go el valor del blanco.
Se comprueba que los resultados óptimos se obtienen con soportes de celulosa al 5%, [INT]=3,95·10-4 M, [diaforasa]=0,67 U/mL, [NAD]= 3,33·10-3 M y [tropinona reductasa]=0,26 mg/mL, obteniéndose un intervalo de respuesta lineal de 1,29·10-5 hasta 6·10-5 M y LOD=3,95·10-6 M.
Por último, se aplica el método a la determinación de tropina en muestras de trigo sarraceno y se comprueba que no hay efecto matriz, obteniendo unos valores de recuperación entorno al 75%.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado