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Estudio epidemiológico y molecular de Blastocystis sp. en el Área Sanitaria 3 de Zaragoza-España

Matovelle Ochoa, Cristina Ofelia
Quílez Cinca, Joaquín (dir.) ; Monteagudo Ibáñez, Luis Vicente (dir.)

Universidad de Zaragoza, 2023

Resumen: Blastocystis sp. está considerado uno de los parásitos más prevalentes en muestras fecales humanas en todo el mundo. En el presente trabajo se ha realizado un estudio epidemiológico y molecular para investigar su prevalencia y diversidad genética en pacientes con síntomas gastrointestinales pertenecientes al área sanitaria 3 de Zaragoza-España y diagnosticados en el Servicio de Microbiología y Parasitología del Hospital Clínico Universitario Lozano Blesa de esta ciudad. Por una parte, se ha realizado un estudio de casos y controles (1:9.89, ~ 10) en el que se analizaron un total de 6.087 muestras fecales recogidas en 3.682 pacientes entre el 1 de enero y 31 de diciembre de 2018, investigando la presencia de Blastocystis sp. y otros patógenos intestinales mediante técnicas microscópicas y microbiológicas. En todos los pacientes se recogieron además variables demográficas, antoprométricas y médicas, con el fin de determinar su posible asociación con la infección por Blastocystis sp. Tras el diagnóstico microscópico se ha detectado una elevada prevalencia de este microorganismos (9,2%), siendo el parásito más prevalente en la zona de estudio y el único identificado en la mayoría de pacientes infectados. Se ha observado que la probabilidad de estar infectado es signficativamente mayor en individuos de bajo peso y en aquéllos que procedían de América Central y del Sur, y especialmente de Africa. Entre las variables asociadas positivamente a la infección por Blastocystis sp. también se incluyen determinados síntomas gastrointestinales (dolor abdominal, anorexia, halitosis), junto con la presencia de eosinofilia relativa, co-infecciones con bacterias patógenas, padecimiento de diabetes tipo 2 o administración de determinados tratamientos inmunosupresores. Por el contrario, no se observó una relación estadística con otros síntomas como presencia de diarrea o fiebre, ni tampoco con procesos como el síndrome de colon irritable.
En una segunda fase se ha realizado un estudio molecular de las muestras positivas a Blastocystis sp. con el fin de identificar los subtipos del parásito circulantes en la población objeto de estudio e investigar su filogenia, diversidad genética y grado de homología con aislados de origen humano y animal depositados en GenBank®. Para ello se ha utilizado un protocolo de PCR que amplifica un fragmento del gen de SSU-rRNA de ~ 479bp. Este fragmento contiene una región variable que permite el subtipado tras secuenciación Sanger y posibilita el análisis filogenético. En total se identificaron cuatro subtipos, incluyendo las variantes ST3 (34,7%) y ST2 (34,1%), junto con dos subtipos minoritarios (ST1 y ST4) que fueron observados con idéntica frecuencia (15,6% cada uno). En algunos pacientes se identificaron infecciones mixtas en los subtipos ST1 y ST2, que fueron evidenciadas por la presencia de picos dobles en trazos de los cromatogramas, lo que indica que un mismo hospedador puede estar infectado por múltiples subtipos. El análisis de las secuencias también ha revelado la presencia de alelos de Blastocystis sp. no descritos previamente, siendo destacable que algunas secuencias fueron idénticas a otras de origen humano y especialmente de diversas especies animales depositadas en GenBank®, lo que apoyaría el carácter zoonótico potencial de este parásito. Finalmente, cabe destacar los hallazgos del estudio filogenético por Neighbor Joining, que revela la alta variabilidad de los subtipos ST1 y ST2, lo que sugiere su origen polifilético o un proceso evolutivo más largo en el tiempo. La variabilidad es por el contrario mucho menor en las secuencias de subtipos ST3 y especialmente ST4, lo que apoyaría su origen monofilético y transmisión más reciente a humanos. El objetivo de este trabajo de investigación es profundizar en el conocimiento de la epidemiología clínica y molecular de la infección por Blastocystis sp., mediante un estudio de casos y controles en pacientes con síntomas gastrointestinales pertenecientes al área sanitaria 3 de Zaragoza, utilizando para ello técnicas microscópicas y moleculares.

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