13102 20170831220305.0 TAZ-TFM-2013-1180 spa Sánchez Serrano, Claudia Ecología medioambiental de legionella SPP. Estudio de su capacidad antimicrobiana frente a bacterias gram positivas y gram negativas mediante la producción de bacteriocinas Zaragoza Universidad de Zaragoza 2013 by-nc-sa Creative Commons 3.0 http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/ Trabajo realizado con la ayuda del Gobierno de Aragón. Centro de referencia microbiológico de Aragón 2013:0467. Resumen: Basados en el criterio ecológico y al haber comprobado la elevada sensibilidad in vitro de las legionelas a bacterias gram negativas (géneros pseudomonas, burkholderia, stenotrophomonas y aeromonas), así como géneros de la familia enterobacteriaceae (escherichia, klebsiella, enterobacter, citrobacter, serratia, proteus y salmonella) y en menor grado a bacterias gram positivas (BGP) (géneros staphylococcus y streptococcus), se ha ampliado este estudio con el análisis de la actividad de las legionelas sobre diversas cepas de BGN y BGP. Se pretende: 1. Estudiar la posible transferencia de bacteriocinas producidas por legionelas frente a diversas bacterias. Se inicia en legionella spp y finaliza también en estas receptoras. 2. Comparar los halos de inhibición de 3 cepas de SG.1 y una de las siguientes: SG. 7, SG. 8, SG. 9 SG. 11 y SG. 13 e investigar la estructura colonial/biofilm de L. bozemanii SG. 2. Para ello se ha trabajado con 25 cepas de legionella spp. El estudio de la producción de bacteriocinas y su actividad frente a otras bacterias se ha llevado a cabo con el método descrito por R. Gómez-Lus et. al. El estudio de la estructura de legionella pneumophila y legionella bozemanii se ha realizado siguiendo el método descrito por M.L. Gómez-Lus et. al. Se ha logrado la transferencia de bacteriocinas en 23 experimentos partiendo de diferentes especies de legionella spp., combinaciones de 2 receptoras (7), de 3 (8) y de 4 (8). Se confirma la eficiente intercomunicación entre bacterias gram positivas y gram negativas. La sensibilidad de 2 cepas de staphylococcus aureus en 8 estirpes de legionella pneumophila (3), L. anisa (1), L. bozemanii (2), L. jordanis y L. oakridgensis. Llama la atención la especial actividad de Lp1 (Knoxville) sobre S. pneumoniae y S. aureus. Con anterioridad demostramos la actividad bacteriocinogénica de Legionella spp. Más adelante, publicamos los resultados de la obtención del extracto enzimático crudo con las cepas de L. pneumophila (UZ71289) y L. bozemanii SG. 2 (ATCC35545). En este estudio incluimos 14 especies de las que obtuvimos el E.E.C. sustituyendo las receptoras de L. anisa o L. oakridgensis por E. faecalis (ATCC19433), N. lactamica (ATCC23970) y N. sicca (ATCC9913). Los objetivos son los siguientes: 1. Crecer en medio líquido específico para legionelas, las siguientes cepas: L. pneumophila SG. 1 (4), L. bozemanii SG. 1 y SG. 2, L. cherrii, L. hackeliae SG. 1 y SG. 2, L. jamestownensis, L. jordanis, L. Resumen: longbeachae SG. 1 y SG. 2, L. maceachearnii, L. micdadei y L. oakridgensis. 2. Determinar las unidades arbtirarias (UA) de cada muestra: dilución máxima que determina una clara zona inhibtoria. 3. Estudiar la sensibilidad a proteasas, a lisozima, respuesta a temperaturas y estabilidad a pHs diferentes. Para ello se ha trabajado con 16 cepas de legionella spp. Conservadas a 80ºC que se descongelan para realizar los experimentos en 30 días. El medio de cultivo para 850 ml de agua destilada: 10 gr. de extracto de levadura, 1 gr. de alfa-cetoglutarato, 10 gr. de ACES buffer, 100 ml. de agua a un pH de 6.9 con 1 N KOH, 0,4 gr. de L-cisteína y 0,25 gr. de pirofosfato férrico en 10 ml de agua. Las bacteriocinas producidas por Legionella spp. tienen un espectro de actividad amplio: son activas frente a E. faecalis, N. lactamica y N. sicca. Se ha comprobado lo siguiente: 1. En los extractos de las 16 cepas se comprobó su naturaleza proteica y estabilidad ante pHs de 3 a 11. 2. Poseen un mecanismo de actividad bactericida. 3. La bacteriocinogénesis no está codificada por plásmidos. 3. La inmunidad a su bacteriocinas está muy limitada en las legionelas. 4. La evaluación ecológica sugiere que el SG. 1 de L. pneumophila está mejor dotada ya que es un buen productor de bacteriocinas y en especial, es muy resistente para una posible competición/recepción de señales. Los resultados obtenidos sobre la capacidad de L. pneumophila SG. 1 y otros serogrupos sobre todo el 6, de colonizar los sistemas de abstencimiento de agua potable, confirman su papel de reservorio primario. Máster Universitario en Salud Pública Derechos regulados por licencia Creative Commons legionella bacteriocinas Gómez-Lus Lafita, Rafael dir. Universidad de Zaragoza Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública Microbiología 499261@celes.unizar.es 5061776 http://zaguan.unizar.es/record/13102/files/TAZ-TFM-2013-1180.pdf Memoria (spa) oai:zaguan.unizar.es:13102 driver trabajos-fin-master TAZ TFM MED