000135425 001__ 135425 000135425 005__ 20240528124320.0 000135425 037__ $$aTESIS-2024-187 000135425 041__ $$aspa 000135425 1001_ $$aGiner Audivert, Jacobo 000135425 24500 $$aEstudio de la infección por leishamania infantum en mustélidos 000135425 260__ $$aZaragoza$$bUniversidad de Zaragoza, Prensas de la Universidad$$c2024 000135425 300__ $$a126 000135425 4900_ $$aTesis de la Universidad de Zaragoza$$v2024-179$$x2254-7606 000135425 500__ $$aPresentado: 19 01 2024 000135425 502__ $$aTesis-Univ. Zaragoza, , 2024$$bZaragoza, Universidad de Zaragoza$$c2024 000135425 506__ $$aby-nc$$bCreative Commons$$c3.0$$uhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/es 000135425 520__ $$aIntroducción o motivación de la tesis:<br />En base a la evidencia de los primeros casos clínicos de infección por Leishmania infantum (L. infantum) en mustélidos (Giner et al., 2020; Cantos-Barreda et al., 2020), así como la detección de L. infantum en diversos mustélidos silvestres en la Península Ibérica y en visones americanos en Grecia, los objetivos del presente trabajo de tesis doctoral se han centrado en la caracterización de la infección de L. infantum en mustélidos, concretamente en el hurón doméstico y en el visón europeo, estudiando los aspectos epidemiológicos, aspectos clínicos y la respuesta inmunitaria de los mismos hacia la infección. Con todo ello, los objetivos principales de la tesis doctoral han sido los siguientes:<br />1. Evaluación de la situación epidemiológica de L. infantum en el hurón doméstico mediante un estudio de seroprevalencia en la zona endémica donde fueron detectados los primeros casos clínicos de leishmaniosis.<br />2. Evaluación de la situación epidemiológica de L. infantum en visón europeo y visón americano en el Norte de la Península Ibérica; una de las tres poblaciones existentes en todo el mundo de visón europeo, uno de los mamíferos más amenazados que actualmente existen en el mundo, en la que estos conviven con poblaciones asilvestradas de visón americano.<br />3. Caracterización de la evolución de los anticuerpos anti-L. infantum en hurones seropositivos en una zona endémica de la enfermedad.<br />4. Caracterización clínica de los hurones seropositivos a L. infantum. Detectar los signos clínicos en hurones seropositivos compatibles con infección natural por L. infantum, así como estudiar la evolución serológica y clínico-patológica tras el tratamiento de la infección clínica por L. infantum.<br />El objetivo final de esta tesis doctoral ha sido profundizar en diversos aspectos de la infección por L. infantum en mustélidos.<br />Contenido de la investigación:<br />La medicina de animales exóticos y silvestres se encuentre en vías de desarrollo en muchas áreas, en comparación con la medicina canina y felina; principalmente debido a la falta de técnicas específicas y valores de referencia para este tipo de animales, lo que hace que el estudio de enfermedades en estas especies suponga un reto para la medicina veterinaria. El objetivo general recogido en esta tesis doctoral ha sido profundizar en diversos aspectos de la Leishmaniosis en mustélidos. Para ello, se llevaron a cabo dos estudios sobre la evaluación de la situación epidemiológica de L. infantum en el hurón como animal de compañía en la Provincia de Valencia y en el visón europeo y americano como mustélidos silvestres en el Norte de España; la caracterización de la evolución de los anticuerpos anti-L. infantum en hurones seropositivos en una zona endémica de la enfermedad; y la caracterización clínica de los hurones seropositivos a L. infantum. Dada la amplitud y variabilidad de dichos estudios, se ha realizado una discusión general dividiéndola en los diferentes aspectos estudiados:<br />I. Evaluación de la situación epidemiológica de L. infantum del hurón.<br />En este trabajo de investigación se ha realizado un estudio sobre la prevalencia de la infección por L. infantum en hurones domésticos en un área endémica de leishmaniosis canina, en la Provincia de Valencia (España), situada en la costa este de la Península Ibérica. Para ello se utilizaron muestras de sangre residuales extraídas durante chequeos rutinarios de salud de 102 hurones. Se recogió sangre de cada animal para estudios serológicos y análisis molecular. Para la detección de anticuerpos contra L. infantum se utilizaron dos métodos serológicos, la técnica WB y la técnica ELISA utilizando antígenos sonificados de L. infantum (MHOM/FR/78/LEM75zymodema MON-1), y para la detección de ADN de L. infantum se realizó la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa.<br />Muestras provenientes de 29 hurones (28,4%) resultaron positivas en al menos una de las tres técnicas realizadas, siendo el Intervalo de Confianza (IC) del 95%; 20,6-37,9%. Veinte de estos fueron diagnosticados como positivos solo por WB, y solo tres por ELISA; mientras que seis hurones dieron positivo por ambas técnicas serológicas. La tasa de la seropositividad fue alta tanto por ELISA como por WB, aunque el número de casos positivos detectados por WB fue mayor estadísticamente significativo (P < 0,008). Otros resultados interesantes del estudio estadístico aportan que no se detectó asociación significativa (P >0,05) entre la positividad de Leishmania y el género (masculino/femenino), edad (joven, adulto, senior), convivencia con un perro, o estilo de vida (interior, exterior o mixto).<br />Los resultados descritos en este estudio son altamente sugestivos de un posible papel de los hurones como reservorio de infección por Leishmania. No obstante, aunque los datos obtenidos demuestran la exposición de los hurones al parásito L. infantum, la mera presencia de anticuerpos frente al mismo no es suficiente para considerar al hurón como reservorio de la enfermedad. Estos resultados deberían tenerse en cuenta ya que los hurones de este estudio proceden de una región donde la tasa de Leishmaniasis en humanos ha ido incrementándose en los últimos años, siendo la Comunitat Valenciana la zona geográfica española donde se ha detectado un mayor número de casos con una tasa anual de 2,63 casos/100000 habitantes, con un total de 471 casos entre 2014 y 2017, lo que supone un 34,7% del total de casos notificados a la Red Nacional de Vigilancia Epidemiológica (Fernández et al., 2019). Del mismo modo la incidencia de leishmaniosis canina en el sudeste de la Península Ibérica con una tasa anual entre 50 y 100 casos/1000 perros entre 2015 y 2017(Le Rutte et al., 2021) es de 17,1% (Montoya-Alonso et al., 2020) considerándose la Comunitat Valenciana como una zona hiperendemica con un riesgo alto de infección por L. infantum en perros (Galvez et al., 2020). Por todo ello, sería recomendable realizar un xenodiagnóstico para confirmar si esta especie es un hospedador accidental o un hospedador reservorio (primario o secundario) de L. infantum y así poder llevar a cabo medidas preventivas necesarias para la detección temprana de los hurones infectados, seguida de diversas medidas que permitan que la carga infecciosa de estos huéspedes sea lo más reducida posible. Además, serían necesarios estudios con una mayor información epidemiológica para comprender el papel de los hurones como reservorio potencial para la infección humana; así como estudios de cómo la infección por L. infantum podría desarrollar enfermedad en esta especie.<br />II. Evaluación de la situación epidemiológica de L. infantum en visón europeo (Mustela lutreola) y visón americano (Neovison vison) en el Norte de la Península Ibérica.<br />En este trabajo se realiza un estudio sobre la prevalencia de la infección por L. infantum en visones europeos y americanos en dos áreas del Norte de la Península Ibérica, concretamente en la cuenca del Ebro y en la cuenca cantábrica, una zona geográfica donde reside gran parte de la población europea del visón europeo. El objetivo del presente estudio ha sido conocer la prevalencia de infección por L. infantum en el visón europeo y ver si existe relación entre la seropositividad y signos de enfermedad de los sujetos estudiados, como se detectó en un estudio previo en el que se asoció la seropositividad a L. infantum con una mala condición corporal del visón (Tsakmakidis et al., 2019).<br />Entre 2014 y 2020 se examinaron un total de 181 animales (139 visones americanos y 42 visones europeos). Se realizó una extracción sanguínea a todos los individuos incluidos en el estudio y una exploración física completa incluyendo sexo, peso y valoración de la condición corporal a todos los visones europeos. Los sueros obtenidos se evaluaron mediante la técnica ELISA tal y como se describe previamente en la publicación del primer caso clínico de leishmaniosis en hurones domésticos (Giner et al., 2020), con algunas modificaciones. Se obtuvieron unos valores de seroprevalencia de la infección por L. infantum en el visón americano del 45,3% (IC 95 %, 34¿52,4) y del 52,4 % (IC 95 %, 36,4¿ 66.6) en el visón europeo. Por otro lado, no se encontró una asociación significativa (p> 0.05) entre la seropositividad a anticuerpos anti-Leishmania y las variables estudiadas como cuenca del río donde se capturo al animal, el sexo o la condición corporal.<br />La alta incidencia de la infección por L. infantum observada en visones americanos en este trabajo sugiere la necesidad de realizar más estudios como un análisis sobre prevalencia detectada mediante PCR o el xenodiagnóstico en estas especies para poder desarrollar un conocimiento más profundo con el fin de evitar un posible riesgo potencial añadido a la conservación del visón europeo.<br />Del mismo modo, a raíz de los resultados detectados en este estudio, se considera necesario realizar estudios de seroprevalencia tanto en visones americanos criados en cautividad en granjas cercanas a poblaciones de visón europeo, como en mamíferos silvestres capturados dentro de los proyectos de conservación de la vida silvestre que pueden jugar un papel epidemiológico como reservorios secundarios de la enfermedad.<br />III. Caracterización de la evolución de los anticuerpos anti-Leishmania infantum en hurones seropositivos en una zona endémica de la enfermedad.<br />Tras la detección de los primeros casos clínicos de leishmaniosis en mustélidos, se decidió evaluar las variaciones estacionales de las titulaciones de anticuerpos anti-Leishmania infantum en hurones de un área hiperendémica para leishmaniosis canina y comprobar si existía la misma variación encontrada en la especie canina. Para ello, se incluyó un grupo de 21 hurones seropositivos, clínicamente sanos, procedentes de la Provincia de Valencia. A cada hurón se le realizaron dos extracciones sanguíneas de forma aséptica de la vena cava craneal, en dos periodos diferentes, uno durante el periodo de transmisión del parásito por parte del vector (abril-octubre 2020) y otro durante el periodo de no transmisión del parásito por parte del flebótomo responsable (diciembre de 2020-febrero de 2021). Se detectó una reducción significativa en los anticuerpos anti-Leishmania durante el período de no transmisión en comparación con el período de transmisión. Durante el período de transmisión 17 hurones presentaron valores positivos bajos, 3 valores de anticuerpos positivos medios y un hurón un valor positivo alto. Por otro lado, durante el período de no transmisión, se observó una disminución de la titulación de anticuerpos en los que, siete hurones se volvieron seronegativos, 11 hurones tuvieron un positivo bajo y finalmente tres hurones tuvieron un título positivo medio.<br />Durante el período de no transmisión, los niveles de anticuerpos anti- Leishmania disminuyeron en 12 de 21 (57,14 %) hurones. Los anticuerpos anti- Leishmania aumentaron en cuatro hurones (19 %). Dos de ellos aumentaron desde niveles bajos a niveles medios, mientras que las titulaciones en los otros dos hurones aumentaron ligeramente, aunque los animales fueron clasificados como positivos bajos. Cinco hurones (23,8 %) mantuvieron una titulación de anticuerpos anti- Leishmania similar durante ambos periodos.<br />Este estudio describe, por primera vez, una variación estacional en los anticuerpos anti-Leishmania detectados en hurones domésticos, después de la exposición natural en un área mediterránea donde L. infantum está presente de forma endémica.<br />IV. Caracterización clínica de los hurones seropositivos a L. infantum.<br />La caracterización clínica de leishmaniosis en hurones seropositivos se plasma en la publicación de diversos trabajos incluidos en la tesis doctoral, describiendo las alteraciones clinicopatológicas detectadas en hurones hasta la fecha.<br />i. Manifestaciones clínicas de leishmaniosis provocada por L. infantum en hurones y otros mustélidos:<br />En esta tesis se presentan los signos clínicos del segundo caso clínico descrito de leishmaniosis en un hurón doméstico, que fue llevado a consulta debido a la presencia de una lesión inflamatoria no pruriginosa en la dermis de la zona del mentón. El paciente presentaba una lesión eritematosa, ulcerativa, edematosa y dolorosa en el margen del labio inferior derecho; linfadenomegalia locorregional y esplenomegalia, sin otros signos clínicos aparentes. Las lesiones piogranulomatosas se observan con frecuencia en hurones, y pueden ser provocadas por diferentes patógenos tales como coronavirus sistémico, Pseudomona luteola, Criptococcus spp o dermatofitos (Lucas et al., 2000; Garner et al., 2008; Morera et al., 2014; Baum et al., 2015, Giner et al., 2018; Giner et al., 2022). Por ello, la leshmaniosis se debe incluir en el diagnostico diferencial de lesiones piogranulomatosas en esta especie.<br />ii. Alteraciones laboratoriales detectadas en hurones y otros mustélidos con leishmaniosis clínica:<br />La alteración laboratorial más característica detectada en todos los casos de leishmaniosis en mustélidos es la alteración de las proteínas séricas (detectando hiperproteinemia) en los tres casos descritos. Por ello, la leishmaniosis se debe incluir en el diagnóstico diferencial de la hiperglobulinemia en hurones domésticos. La hiperglobulinemia es una anormalidad clínico-patológica generalmente asociada con una variedad de infecciones crónicas en esta especie, incluyendo micosis sistémicas, virus (coronavirus sistémico, enfermedad aleutiana o virus del moquillo canino principalmente) y determinadas neoplasias. En la leishmaniosis canina, la electroforesis sérica de proteínas revela igualmente un aumento de proteínas totales y globulinas, así como una gammapatía típicamente policlonal. En este sentido, las alteraciones detectadas en el proteinograma de los hurones con infección clínica por L. infantum fue muy similar a la electroforesis de proteína sérica típica en perros (Maia y Campino, 2018) y gatos (Pennisi et al., 2013) con leishmaniosis clínica, pero no es específica para una sola enfermedad infecciosa en hurones.<br />iii. Tratamiento de la infección por L. infantum en mustélidos con enfermedad clínica:<br />Hasta el momento, no existe información científica sobre un tratamiento farmacológico anti-Leishmania que puede aplicarse en hurones enfermos, puesto que no existen fármacos autorizados para el tratamiento de esta enfermedad en esta especie. En las publicaciones incluidas en esta tesis doctoral se describen por primera vez dos protocolos terapéuticos utilizados en los primeros casos clínicos descritos de leishmaniosis en hurones.<br />En el primer caso de leishmaniosis se utilizó un protocolo terapéutico combinado basado en alopurinol a 10 mg/kg, vía oral, dos veces al día, sine die y antimoniato de meglumina durante tres semanas en dosis crecientes cada semana para controlar los posibles efectos adversos de los medicamentos. El tratamiento a base de alopurinol y antimoniato de meglumina fue bien tolerado en este paciente y demostró clara mejoría clínica, desapareciendo la dermatitis papular en las primeras semanas después de iniciado el tratamiento, que se acompañó de una reducción de los anticuerpos anti-Leishmania. Del mismo modo, las alteraciones detectadas en la electroforesis de las proteínas séricas iniciales, se resolvieron parcialmente hasta que se detectó una infección por Cryptosporidium spp. a los siete meses de iniciado el tratamiento. Igualmente se detectó una disminución de los anticuerpos anti-Leishmania durante los meses en los que se llevó a cabo la combinación terapéutica. No obstante, en este paciente apareció una xantinuria en un control a los seis meses de iniciado el tratamiento con alopurinol, que se resolvió tras la suspensión temporal de la administración de dicho fármaco.<br /> Este caso clínico representa la primera descripción del tratamiento y seguimiento de la leishmaniosis clínica en un hurón doméstico mediante monitorización mensual a lo largo de un año con examen físico de rutina, y pruebas de laboratorio incluyendo hematología, bioquímica sérica, urianálisis, medición de anticuerpos anti-Leishmania mediante serología y PCR.<br />En el segundo caso clínico publicado sobre leishmaniosis clínica en un hurón doméstico e incluido igualmente en esta tesis doctoral, se estableció un protocolo terapéutico anti-Leishmania a base de miltefosina a 2 mg/kg una vez al día durante 28 días por vía oral y alopurinol a 10 mg/kg dos veces al día sine die con resultados satisfactorios y bien tolerado por el paciente. Se encontró una mejoría clínica con resolución a las pocas semanas de tratamiento tanto de la dermatitis piogranulomatosa observada como de la esplenomegalia y la linfadenomegalia detectada. Por otro lado, se observó una reducción de los niveles de anticuerpos anti-Leishmania a lo largo del tiempo. En este caso, tras un año con un tratamiento continuado con alopurinol, no se observó xantinuria en el sedimento de orina en ninguno de los controles periódicos realizados. Este hallazgo sugiere que el efecto adverso que produce el tratamiento continuado con alopurinol en esta especie es variable y aparecerá dependiendo de la respuesta individual de cada paciente, como ocurre en perros tratados con alopurinol de forma continuada.<br />Conclusiones:<br />De los estudios realizados que componen esta tesis doctoral hemos obtenido las siguientes conclusiones:<br />Primera: Nuestro trabajo demuestra por primera vez las tasas de seroprevalencia y prevalencia de L. infantum en mustélidos en dos áreas geográficas de España.<br />Segunda: Los resultados serológicos obtenidos en este estudio indican que los hurones domésticos, mantenidos como animales de compañía, procedentes de una zona endémica de leishmaniosis canina (provincia de Valencia), se encuentran expuestos al parásito de L. infantum, presentando una tasa de seroprevalencia del 28,4% (IC 95%; 20,6-37,9%).<br />Tercera: En nuestro estudio, el visón europeo y el visón americano de la zona norte de la Península Ibérica presentan una alta seroprevalencia de la infección por L. infantum, con una tasa del 52,4 % (IC 95 %, 36,4¿ 66,6) en el visón europeo y del 45,3% (IC 95 %, 34¿ 52,4) en el visón americano.<br />Cuarta: No se ha observado asociación entre nivel de positividad a la exposición del parásito L. infantum y signos clínicos o patológicos de la enfermedad en la mayor parte de los animales analizados (hurones domésticos, visones europeos y visones americanos).<br />Quinta: De nuestro estudio se desprende que existe variación de anticuerpos anti-Leishmania entre el período de transmisión y el período de no transmisión, similar a lo descrito en la especie canina.<br /> Sexta: En este trabajo se describe el segundo caso de leishmaniosis clínica en hurones, así como el tratamiento de los dos primeros hurones domésticos diagnosticados.<br />Séptima: Para el diagnóstico de la leishmaniosis en hurones hemos requerido de la integración del cuadro clínico, las alteraciones laboratoriales (hemograma completo, perfil bioquímico completo, análisis de orina y electroforesis de proteínas séricas), y de un resultado positivo en cualquiera de las técnicas confirmatorias descritas (observación parasitológica, moleculares o serológicas incluyendo ELISA, IFI, WB).<br />Octava: Los dos protocolos terapéuticos utilizados en este trabajo para el tratamiento de los hurones con leishmaniosis clínica (antimoniato de meglumina combinado con alopurinol o miltefosina combinada con alopurinol) han resultado efectivos.<br />Novena: En el seguimiento del tratamiento de los hurones afectados de leishmaniosis clínica de nuestro trabajo, no se han presentado efectos secundarios o reacciones adversas con los protocolos terapéuticos utilizados, con la excepción de la aparición de xantinuria en uno de los pacientes.<br /> 000135425 520__ $$a<br /> 000135425 521__ $$97086$$aPrograma de Doctorado en Medicina y Sanidad Animal 000135425 540__ $$9info:eu-repo/semantics/openAccess 000135425 6531_ $$apatología animal 000135425 6531_ $$aparasitología animal 000135425 6531_ $$aordenación y conservación de la fauna silvestre 000135425 6531_ $$ainmunología veterinaria 000135425 691__ $$a3 000135425 692__ $$a. Garantizar una vida saludable y promover el bienestar para todos y todas en todas las edades 000135425 700__ $$aVillanueva Saz, Sergio $$edir. 000135425 700__ $$aVerde Arribas, María Teresa $$edir. 000135425 7102_ $$aUniversidad de Zaragoza$$b 000135425 830__ $$9498 000135425 8560_ $$fcdeurop@unizar.es 000135425 8564_ $$uhttps://zaguan.unizar.es/record/135425/files/TESIS-2024-187.pdf$$zTexto completo (spa) 000135425 909CO $$ooai:zaguan.unizar.es:135425$$pdriver 000135425 909co $$ptesis 000135425 9102_ $$aCiencias de la Salud$$b 000135425 980__ $$aTESIS