TAZ-TFG-2014-524


Liposomas decorados con Apo2L/TRAIL como tratamiento antitumoral de tumores sólidos

Pejenaute Ochoa, María Dolores
Martínez Lostao, Luis (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2014
Bioquímica y Biología Molecular y Celular department, Bioquímica y Biología Molecular area

Graduado en Biotecnología

Abstract: El propósito principal de este trabajo de fin grado consiste en llevar a cabo la purificación de la proteína Apo2L/TRAIL (TRAIL) y unirla a la superficie de nanopartículas lipídicas (LUV-TRAIL) con el objetivo de usarla como tratamiento antitumoral en tumores sólidos, en concreto de colon, para lo cual se utilizó la línea celular HCT-116 y de riñón empleando la línea celular Caki-1. Para ello, se ha llevado a cabo la purificación de dicha proteína, y la generación de las nanopartículas lipídicas y posteriormente se unió la proteína a su superficie para analizar su bioactividad y capacidad como tratamiento antitumoral comparándola con la proteína soluble. Apo2l/TRAIL es un ligando mortal que interaccionan con sus receptores pro-apoptóticos en células tumorales activando la vía extrínseca de la apoptosis e induciendo la muerte de células cancerosas. Por ello, antes de llevar a cabo los ensayos de citotoxicidad se estudió en ambas líneas la expresión de los receptores de Apo2L/TRAIL. Una vez confirmada ésta, se llevaron a cabo estudios de la citotoxicidad de los LUV-TRAIL comparándolos con TRAIL soluble realizando ensayos dosis-respuesta y se analizó la muerte de las células tumorales mediante citometría de flujo y MTT. También se emplearon durante estos experimentos un anticuerpo bloqueante específico de TRAIL; RIK, con el objetivo de demostrar que la muerte inducida por los LUV-TRAIL en dichas líneas se debe específicamente a TRAIL. Para estudiar los cambios morfológicos nucleares que sufren las células tras el tratamiento con los LUV-TRAIL se realizó una tinción nuclear empleando la sonda fluorescente Hoechst y se analizó mediante microscopía de fluorescencia. Se observó en ambas líneas celulares que tras el tratamiento con los LUV-TRAIL se producían los eventos característicos de la apoptosis como la condensación de la cromatina, la fragmentación del núcleo y la formación de burbujas nucleares llamadas “blebs”. Finalmente, para analizar la capacidad de los LUV-TRAIL de inducir apoptosis se analizó su capacidad de activarlas principales caspasas implicadas en la vía extrínseca de la apoptosis. Para ello, se realizó un Western Blot para ambas líneas celulares tratadas con los LUV-TRAIL para analizar la activación de la caspasa 8 y la caspasa 3, y se realizaron experimentos de citotxicidad empleando los inhibidores de caspasas ZVAD (inhibidor general de caspasas) e IETD (inhibidor específico de caspasa 8), con el objetivo de demostrar que la muerte inducida por los LUV-TRAIL en dichas líneas se produce como consecuencia de la activación de caspasas.


Free keyword(s): liposomas decorados con apol/trail
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado

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