Determinación colorimétrica de hipoxantina mediante métodos enzimáticos y/o generación de nanomateriales.

Albareda Torrijo, Juan
Sanz Vicente, Isabel (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2024
Departamento de Química Analítica, Área de Química Analítica

Graduado en Química

Resumen: El objetivo de este trabajo es desarrollar un método analítico enzimático colorimétrico que permita la determinación de hipoxantina de forma cuantitativa.
Este método está basado en una reacción enzimática que oxida la hipoxantina a ácido úrico produciendo peróxido de hidrógeno en el proceso, el cual se acopla a una reacción indicadora que consiste en la reacción de los peróxidos con un colorante de tal forma que se pueda seguir la reacción mediante espectroscopía de absorción molecular.
En primer lugar, se hace un estudio de la reacción indicadora para decidir que colorante será utilizado. Después se optimizarán los parámetros de la reacción general que son el colorante (TMB o AR) y su concentración, la enzima HRP, la enzima XO y la disolución amortiguadora con su concentración y pH.
Con los resultados obtenidos se realizará la calibración de hipoxantina mediante absorción y fluorescencia sobre una disolución amortiguadora de TRIS 0,1 M a pH 8, con 0,24 U/mL de HRP, 0,2 U/mL de XO y 3·10-5 M de AR. En ambos casos se obtiene una recta de calibrado de las que se obtienen los parámetros analíticos. Mediante absorción se obtiene 70567,11 L/mol de sensibilidad, 2,47·10-8 M de límite de detección, 8,22·10-8 M límite de cuantificación y un rango lineal de 8,22·10-8 M a 1,00·10-5 M. Por fluorescencia se obtiene 6,35·107 L/mol de sensibilidad, 5,34·10-8 M de límite de detección, 1,78·10-7 M límite de cuantificación y un rango lineal de 1,78·10-7 M a 1,50·10-6 M.
A partir de las diferencias en las cinéticas entre xantina e hipoxantina se aborda la determinación de mezclas de ambas permitiendo la determinación de xantina en presencia de hipoxantina.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado