| TAZ-TFG-2024-2449 |
Detección y caracterización de teschovirus porcino en casos clínicos con signos nerviosos
Lafuente Menjón, Isabel
Arnal Bernal, José Luis (dir.)
Moreno Loshuertos, Raquel (ponente)
Universidad de Zaragoza,
CIEN,
2024
Graduado en Biotecnología
Abstract: El teschovirus porcino (PTV) es un virus de RNA de cadena sencilla que presenta un mecanismo de transmisión feco-oral. Este virus es capaz de acceder al sistema nervioso y causar signos neurológicos severos como la poliencefalomielitis, aunque la mayoría de los animales infectados
permanecen asintomáticos.
En el presente trabajo se buscó evidenciar la presencia de teschovirus porcino en diferentes muestras clínicas de cerdos que sufrían un brote agudo de enfermedad neurológica, así como su caracterización a través de la secuenciación del gen VP1 al ser la región que concentra la mayor variabilidad genética y permite diferenciar los serotipos. De esta manera se pretendía establecer una relación entre el serotipo de PTV identificado y la gravedad de los signos neurológicos.
Para ello, se analizaron 127 muestras de 9 animales diferentes que presentaban signos clínicos nerviosos. En primer lugar, se llevó a cabo la extracción del RNA de las muestras tras un pretratamiento variable en función del tipo de matriz biológica. Para poder detectar la presencia del virus se realizó una amplificación mediante RT-qPCR utilizando el kit comercial de Exopol “EXOone Porcine Teschovirus oneMIX qPCR kit”, basado en la química de la sonda de hidrólisis fluorogénica. Por último, para intentar caracterizar el teschovirus porcino encontrado en las muestras se seleccionaron aquellas que habían resultado positivas a PTV y se utilizaron diferentes cuartetos de primers con los que se llevó a cabo una PCR anidada para maximizar la sensibilidad, seguida de una electroforesis. Los productos de amplificación seleccionados se secuenciaron mediante la técnica de secuenciación Sanger.
Los resultados obtenidos evidenciaron la presencia de PTV en muestras relacionadas con el sistema digestivo de los animales bajo estudio, no así en aquellas tomadas de localizaciones sistémicas o del sistema nervioso. Además, no fue posible el genotipado del PTV por la ausencia de resultados en la secuencia del virus.
En conclusión, aunque se exploró en profundidad la conexión entre el agente etiológico y la enfermedad, no se puede concluir con los resultados obtenidos y la información disponible que el brote de enfermedad se deba a teschovirus porcino, a pesar de que los animales tuvieran signos compatibles.
permanecen asintomáticos.
En el presente trabajo se buscó evidenciar la presencia de teschovirus porcino en diferentes muestras clínicas de cerdos que sufrían un brote agudo de enfermedad neurológica, así como su caracterización a través de la secuenciación del gen VP1 al ser la región que concentra la mayor variabilidad genética y permite diferenciar los serotipos. De esta manera se pretendía establecer una relación entre el serotipo de PTV identificado y la gravedad de los signos neurológicos.
Para ello, se analizaron 127 muestras de 9 animales diferentes que presentaban signos clínicos nerviosos. En primer lugar, se llevó a cabo la extracción del RNA de las muestras tras un pretratamiento variable en función del tipo de matriz biológica. Para poder detectar la presencia del virus se realizó una amplificación mediante RT-qPCR utilizando el kit comercial de Exopol “EXOone Porcine Teschovirus oneMIX qPCR kit”, basado en la química de la sonda de hidrólisis fluorogénica. Por último, para intentar caracterizar el teschovirus porcino encontrado en las muestras se seleccionaron aquellas que habían resultado positivas a PTV y se utilizaron diferentes cuartetos de primers con los que se llevó a cabo una PCR anidada para maximizar la sensibilidad, seguida de una electroforesis. Los productos de amplificación seleccionados se secuenciaron mediante la técnica de secuenciación Sanger.
Los resultados obtenidos evidenciaron la presencia de PTV en muestras relacionadas con el sistema digestivo de los animales bajo estudio, no así en aquellas tomadas de localizaciones sistémicas o del sistema nervioso. Además, no fue posible el genotipado del PTV por la ausencia de resultados en la secuencia del virus.
En conclusión, aunque se exploró en profundidad la conexión entre el agente etiológico y la enfermedad, no se puede concluir con los resultados obtenidos y la información disponible que el brote de enfermedad se deba a teschovirus porcino, a pesar de que los animales tuvieran signos compatibles.
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado
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