Estudio y purificación de los sustratos aceptores de la proteína O-fucosiltransferasa

Murciano Trigo, Daniel
Hurtado Guerrero, Ramón (dir.) ; González Valero, Jessika (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2014
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular,

Graduado en Biotecnología

Resumen: La O-fucosilación es una modificación post-traduccional que tiene lugar generalmente en un gran número de proteínas de membrana o secretadas. Múltiples estudios han revelado que esta modificación está implicada en la señalización celular y plegamiento de proteínas durante el desarrollo embrionario, así como en el metabolismo del tejido adulto. Entre los diferentes elementos implicados en el proceso de O-fucosilación destacan las glicosiltransferasas (GTs) POFUT1 y POFUT2 las cuales transfieren residuos de fucosa desde GDP-fucosa a sustratos aceptores específicos. Mientras POFUT1 fucosila proteínas conteniendo repeticiones con estructura similar al factor de crecimiento epidermal (EGF). POFUT2 fucosila las repeticiones de tromboespondinas tipo 1 (TSRs). En ambas repeticiones se fucosilan residuos de serina o treonina y están formadas por tres puentes disulfuro. Si bien tanto la estructura cristalina de POFUT2 como la de los dominios TSR ha sido resuelta mediante la difracción por rayos X en múltiples estudios, sigue sin conocerse con precisión el mecanismo de transferencia de cómo la POFUT2 reconoce los TSRs y de por tanto como se fucosilan. En este sentido optimizaremos la expresión y purificación de diferentes dominios TSR para posteriormente caracterizar cualitativa y cuantitativamente la interacción entre estos y la enzima POFUT2. Además, algunos de estos dominios se utilizarán para obtener una estructura cristalina junto con la POFUT2 con el fin de elucidar el mecanismo de reacción de la fucosilación y se cómo esta GT reconoce a sus sustratos aceptores.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado