TAZ-TFG-2015-1996


Evaluación del efecto de potenciales inhibidores de la actividad ferredoxina reductasa de Xanthomonas axonopodis pv citri, que actúa como patógeno en cultivos de cítricos

Carrazana Villalba, Sergio Javier
Martínez Júlvez, Marta María (dir.) ; Medina Trullenque, María Milagros (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2015
Bioquímica y Biología Molecular y Celular department, Bioquímica y Biología Molecular area

Graduado en Biotecnología

Abstract: Este trabajo se incluye dentro de un proyecto de búsqueda de compuestos que presenten acción bactericida contra el microorganismo patógeno Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), una bacteria que causa la enfermedad del cáncer de cítricos. Xanthomonas es una bacteria Gram negativa que posee una enzima, la NADPH-flavodoxina (ferredoxina) reductasa (XacFPR), que se ha utilizado en este proyecto como diana terapéutica, debido a sus diferencias estructurales y funcionales con sus homólogas en las células eucariotas vegetales, las FNRs plastídicas. De este modo se busca inhibir la enzima del fitopatógeno sin ocasionar daño a la planta hospedadora mediante el descubrimiento de un bactericida eficaz. El objetivo supone todo un reto, ya que existe un método efectivo para evitar los efectos de Xanthomonas, que incluyen graves daños en los cítricos de diferentes países del mundo, incluyendo España, reduciendo enormemente la producción, lo que conlleva grandes pérdidas económicas sin que existan métodos efectivos para frenar su avance. Los potenciales inhibidores de la XacFPR estudiados en esta memoria, 43 compuestos, fueron seleccionados con anterioridad mediante cribado masivo a partir de una quimioteca formada por 11.120 compuestos. En este trabajo se ha medido el valor IC50 de estos compuestos mediante la actividad diaforasa de la XacFPR y se han realizado ajustes globales de los datos cinéticos obtenidos en presencia de un compuesto con alta eficacia de inhibición, a las funciones de Michaelis-Menten y sus inversos modificadas por el factor de inhibición para determinar el tipo de inhibición. En este trabajo se ha concluido que dicho compuesto produce una inhibición efectiva de un 94,6 % de la actividad reductasa de la XacFPR y con un IC50 de 9.7 µM mediante un posible mecanismo de inhibición no competitiva, con un valor de KI de 5 µM. Los experimentos preliminares de acoplamiento molecular, "docking", muestran que dicho compuesto se une a XacFPR en el sitio donde se encuentra el cofactor FAD. Con este compuesto seleccionado se podrán realizar pruebas de inhibición in vivo donde se comprobará la efectividad del bactericida y su inocuidad en las plantas hospedadoras.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado

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