000032234 001__ 32234 000032234 005__ 20170831220705.0 000032234 037__ $$aTAZ-TFM-2015-753 000032234 041__ $$aspa 000032234 1001_ $$aSolana González, Begoña 000032234 24500 $$aEstudio de flavoproteínas mediante el uso de Microscopía de fuerzas atómicas 000032234 260__ $$aZaragoza$$bUniversidad de Zaragoza$$c2015 000032234 506__ $$aby-nc-sa$$bCreative Commons$$c3.0$$uhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/ 000032234 520__ $$aEl objetivo de este proyecto es el estudio análisis por primera vez de las fuerzas de interacción entre una enzima y su substrato enzimático usando una aproximación de molécula única. Se utilizará el AFM en su variante de Espectroscopia de Fuerzas de Molécula Única (SMFS) para analizar las fuerzas intermoleculares que mantienen unido el complejo formado por la flavoenzima Ferredoxina-NADP+ reductasa (FNR) y substrato enzimático, NADP+. La FNR de plantas participa en la cadena fotosintética recibiendo electrones de las proteínas ferredoxina/ flavodoxina y transfiriéndolos al substrato NADP+ que se reduce a NADPH. Los resultados no sólo proporcionarán datos de mecanoestabilidad del complejo sino otros parámetros del estado de transición asociado al proceso de disociación (koff). En este trabajo, la enzima FNR será inmovilizada covalentemente en substratos de mica, y el NADP+ en la punta del cantiléver, para lo que se ha diseñado un procedimiento que utilizará un espaciador flexible de polietilenglicol modificado para unirse por un lado a la punta y por otro al ligando modificado con un entrecruzador. Posteriormente se realizarán las medidas de SMFS consistentes en la toma de cientos de aproximaciones o curvas Fz entre muestra y punta funcionalizadas a diferentes velocidades de carga (piconewtons/s). Con los datos de los picos de las curvas Fz que registren la ruptura de enlaces se construirán histogramas que proporcionarán fuerzas de ruptura más probable. Utilizando el modelo de Ritchie-Evans se obtendrá el paisaje y otros parámetros de la disociación del complejo. 000032234 521__ $$aMáster Universitario en Biología Molecular y Celular 000032234 540__ $$aDerechos regulados por licencia Creative Commons 000032234 700__ $$aGracia Lostao, Ana Isabel$$edir. 000032234 700__ $$aMartínez Júlvez, Marta María$$edir. 000032234 7102_ $$aUniversidad de Zaragoza$$bBioquímica y Biología Molecular y Celular$$cBioquímica y Biología Molecular 000032234 8560_ $$f712015@celes.unizar.es 000032234 8564_ $$s1761748$$uhttps://zaguan.unizar.es/record/32234/files/TAZ-TFM-2015-753.pdf$$yMemoria (spa) 000032234 909CO $$ooai:zaguan.unizar.es:32234$$pdriver$$ptrabajos-fin-master 000032234 950__ $$a 000032234 951__ $$adeposita:2015-11-11 000032234 980__ $$aTAZ$$bTFM$$cCIEN