Caracterización molecular de especies, genotipos y subtipos de cryptosporidium spp. aislados en humanos en España e identificación de giardia duodenalis por técnicas moleculares

Cieloszyk, Joanna Magdalena
Clavel Parrilla, Antonio (dir.) ; Goñi Cepero, María Pilar (dir.)

Universidad de Zaragoza, 2016
(Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública)


Abstract: Cryptosporidium spp. es uno de los protozoos más frecuentes relacionados con trastornos gastrointestinales, sobre todo en niños. La cryptosporidiosis es una zoonosis de distribución mundial. Giardia duodenalis produce una infección cosmopolita que afecta a humanos y animales. Causa trastornos gastrointestinales, pero también puede ser asintomática. El objeto de este estudio es avanzar en el conocimiento de las poblaciones de Cryptosporidium spp. circulantes en las provincias de Zaragoza y León, el estudio de un brote ocurrido en la provincia de Granada y también el establecimiento de un criterio para determinar la relación epidemiológica de aislamientos de Giardia duodenalis. Ciento noventa y cuatro muestras procedentes de niños de entre 0-9 años (excepto 4 muestras de adultos) previamente diagnosticadas como positivas para Cryptosporidium por microscopía y procedentes de pacientes de Zaragoza, León y Granada y aisladas entre los años 2006 y 2013 se sometieron a PCR para amplificar un fragmento del gen SSUrRNA y posterior RFLPs con SspI y VspI. Ciento cuarenta y una de ellas resultaron positivas. Todas las muestras, independientemente del análisis del gen SSU, fueron sometidas al análisis de un fragmento del gen GP60. De las 194 muestras 153 dieron positivas por uno de los métodos o ambos. Todas las muestras positivas (con SSU y GP60) se sometieron a secuenciación del amplificado para confirmar la especie detectada y detectar los subtipos. Las especies detectadas fueron: C. hominis en 115 (75.1% de los casos), C. parvum en 35 (22.9%), C. ubiquitum 2 (2%) y C. felis 1 (2%). Se subtiparon 102 muestras, identificando 18 subtipos diferentes, de los cuales el más prevalente fue el IbA10G2R2 (66% de todos los subtipos). No se encontró asociación estadísticamente significativa entre especie y ámbito. Sin embargo, la prevalencia de C. hominis resultó ser mayor que la de C. parvum tanto en el medio urbano como en el medio rural, con más del 70%. Tampoco se encontró asociación estadísticamente significativa entre especie y el mes de aislamiento, pero cuando se tomaron todas las muestras en conjunto se observó un aumento de los casos en el tercer cuatrimestre del año (46% frente a 24% del primer cuatrimestre). En cuanto al género, se observó que el número de casos de C. hominis fue igual entre hombres y mujeres mientras que C. parvum se encuentra más frecuentemente en los hombres. Analizando las asociaciones entre los subtipos encontrados y las demás variables estudiadas en el trabajo, no se ha encontrado ninguna asociación estadísticamente significativa. Este estudio representa la primera descripción en humanos de C. ubiquitum en España, y de la distribución de especies de Cryptosporidium en niños en la provincia de León. Es también la primera descripción de los subtipos IaA11R2, IfA13G1, IbA12G3R2 y IbA9G3R2 de C. hominis en los humanos en España y/o Europa, así como de los subtipos IIaA17G2R1, IIaA12G1R1, IIaA19G2R1, IIaA18G3R1, IIaA13G2R1, IIdA29G1, IIdA19G1, IIdA20G1b y IIdA17G1 de C. parvum no descritos anteriormente en humanos en España. Los resultados encontrados en el estudio de Giardia duodenalis del mismo paciente sugieren que las infecciones por este parásito se producen normalmente por una mezcla de varios genotipos pertenecientes al mismo assemblage o que existe fase de reproducción sexual en Giardia, puesto que la variabilidad genética encontrada en aislamientos procedentes de un mismo paciente es igual o mayor que la encontrada en aislamientos procedentes de pacientes diferentes incluso geográficamente alejados. Por lo tanto, los métodos utilizados para la genotipificación no permiten la diferenciación entre individuos en Giardia duodenalis. Bibliografía consultada Chalmers RM, Hadfield SJ, Jackson CJ, Elwin K, Xiao L and Hunter P (2008) Geographic Linkage and Variation in Cryptosporidium hominis. Emerg Infct Dis 14(3): 496-498. Choy SH, Mahdy MAK, Al Mekhlafi HM, Low VL and Surin J (2015) Population expansion and gene flow in Giardia duodenalis as revealed by triosephosphate isomerase gene. Parasites&Vectors; 8: 454. Fayer R, Santín M, Macarisin D (2010) Cryptospordium ubiquitum n. sp. in animals and humans. Vet Parasitol 172: 23-32. Goñi P, Aldana DE, Clavel A, Seral C, Remacha MA y Castillo FJ (2010) Prevalencia de Giardia duodenalis genotipo B en humanos en Zaragoza y León, España. Emferm Infecc Microbiol Clin 20(10): 710-712. Goñi P, Almagro-Nievas D, Cieloszyk J, Lobez S, Navarro-Marí JM, Gutierrez-Fernandez J (2015) Cryptosporidiosis outbreak in child day-care center caused by an unusual Cryptosporidium hominis subtype. Enferm Infecc Microbiol Clin doi: 10.1016/j.eimc.2015.02.003 Navarro-I-Martinez L, da Silva AJ, Llovo Taboada J, Del Ágiula C, Pieniazek NJ, Bornay-Llinares FJ (2013) Molecular characterization of Cryptosporidium spp. isolated in humans in two different locations in Spain. Enferm Infecc Microbiol Clin 31(8): 506-510. Quilez J, Torres E, Chalmers RM, Robinson G, del Cacho E and Sanchez-Acedo C (2008) Cryptosporidium species and subtype analysis from dairy calves in Spain. Parasitol 135: 1613-1620. Sulaiman IM, Fayer R, Bern C, Gilman RH, Trout JM, Schantz PM, Das P, Lal AA and Xiao L (2003) Triosephosphate Isomerase Gene Characterization and Potential Zoonotic Transmission of Giardia duodenalis. Emerg Infect Dis 9(11): 1444-1452. Sulaiman IM, Hira PR, Zhou L, Al-Ali FM, Aa-Shelahi FA, Shweiki HM, Iqbal J, Khalid N, Xiao L (2005) Unique Endemicity of Cryptosporidium in Children in Kuwait. Journ Clin Microbiol 43(6): 2805-2809.

Pal. clave: parasitología humana ; parasitología molecular ; genética molecular ; epidemiología

Knowledge area: Microbiología

Department: Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública

Nota: Presentado: 15 04 2016
Nota: Tesis-Univ. Zaragoza, Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública, 2016

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 Record created 2016-05-04, last modified 2019-02-19


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