Análisis de la abundancia relativa y de los estados conformacionales de las omega-3 desaturasas plastidiales de Arabidopsis thaliana

Díaz-Guerra Aparicio, Raúl
Alfonso Lozano, Miguel (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2017

Graduado en Biotecnología

Resumen: Las omega-3 desaturasas FAD7 y FAD8 son proteínas integrales de membrana localizadas en las envueltas plastidiales y responsables de la síntesis de ácidos grasos trienoicos. Su actividad es crucial para el correcto funcionamiento de las membranas biológicas, manteniendo su fluidez. Además, los ácidos grasos trienoicos son precursores de la biosíntesis de jasmonatos, hormonas clave en las respuestas defensivas frente al ataque por patógenos. Pese a su enorme relevancia en la fisiología vegetal, todavía se desconocen datos importantes como sus parámetros cinéticos, abundancia relativa, organización cuaternaria o estructura tridimensional. El motivo es que las aproximaciones bioquímicas convencionales (purificación, uso de anticuerpos específicos, estudios enzimológicos) no son posibles con estas enzimas, al ser proteínas homólogas con alto grado de similitud y con elevado carácter hidrofóbico. Como alternativa, el Grupo de Investigación de la EEAD-CSIC ha desarrollado unas líneas transgénicas de Arabidopsis thaliana que expresan las proteínas AtFAD7 y AtFAD8 bajo el control de su promotor endógeno y fusionadas a la proteína fluorescente verde (GFP). En este trabajo se ha analizado la abundancia relativa de FAD7 y FAD8 mediante inmunodetección con anticuerpo anti-GFP en diferentes tejidos y en respuesta a distintos estreses ambientales. Los resultados muestran que FAD7 es más abundante que FAD8 tanto en hojas (tejido fotosintético) como en raíces (tejido no fotosintético) y que FAD7 es más abundante en hojas que en raíces. Al no conseguir detectar la proteína FAD8, mucho menos abundante, el trabajo se ha enfocado en FAD7, cuya abundancia en hojas aumenta en respuesta a los estímulos de herida y de la hormona metil jasmonato y disminuye en respuesta al ácido abscísico. Además, los resultados apuntan a un control fundamentalmente transcripcional de la expresión de FAD7. Finalmente, la obtención de agregados de alto peso molecular podría responder a la existencia de complejos supramoleculares en los que participe FAD7.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado