64242 20171221155215.0 TAZ-TFG-2017-2182 spa López González, Paloma Enzymatic determination of acetylcholine. First steps towards the developement of an optical biosensor Determinación enzimática de acetilcolina. Primeros pasos hacia el desarrollo de un biosensor óptico Zaragoza Universidad de Zaragoza 2017 by-nc-sa Creative Commons 3.0 http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/ El objetivo del presente trabajo es la optimización de un método analítico para la determinación del neurotransmisor acetilcolina y dar los primeros pasos hacia su implantación en un biosensor óptico. El método está basado en el acoplamiento de dos reacciones enzimáticas. La primera es una hidrólisis del analito en la que se obtiene colina y la segunda la oxidación de la colina. La enzima responsable de la oxidación, la colina oxidasa, es una flavoenzima y son sus propiedades de fluorescencia las que se utilizan como parámetro analítico de cuantificación. Se han obtenido características analíticas del método tales como el rango lineal: para trabajar en continuo (desde 9,54*10-6M hasta 1,60*10-5M) y en discontinuo (desde 3,70*10-6M hasta 1,6*10-5M). Una vez optimizado el método analítico de determinación de acetilcolina en disolución y comprobado que es posible utilizar esta metodología para el desarrollo de un biosensor enzimático para la determinación de acetilcolina, se han dado los primeros pasos en el desarrollo de una lámina sensora mediante el entrampamiento de colina oxidasa en una lámina de poliacrilamida. Se ha comprobado la actividad de la enzima inmovilizada en la lámina mediante la detección de peróxido de hidrógeno (que es un subproducto de su reacción), pero sin la sensibilidad adecuada. Por ello, estudios posteriores deberán abordar la modificación del procedimiento de inmovilización de la enzima para el correcto seguimiento de los cambios en la señal fluorescente del FAD de la ChOx en la lámina sensora. Graduado en Química Derechos regulados por licencia Creative Commons de Marcos Ruiz, Susana dir. Universidad de Zaragoza Química Analítica Química Analítica 666583@celes.unizar.es 3589074 http://zaguan.unizar.es/record/64242/files/TAZ-TFG-2017-2182.pdf Memoria (spa) oai:zaguan.unizar.es:64242 driver trabajos-fin-grado deposita:2017-12-21 TAZ TFG CIEN