79382 20210520140809.0 TESIS-2019-107 eng 579 Aguilar Pérez, Clara Antimicrobial activity and mode of action of bacteriocin AS-48 against Mycobacterium tuberculosis Zaragoza Universidad de Zaragoza, Prensas de la Universidad 2019 228 Tesis de la Universidad de Zaragoza 2254-7606 2019-87 Presentado: 05 04 2019 Tesis-Univ. Zaragoza, Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública, 2019 Zaragoza, Universidad de Zaragoza 2019 La creciente incidencia de cepas multirresistentes de Mycobacterium<br />tuberculosis y los pocos medicamentos disponibles para su tratamiento están<br />promoviendo el desarrollo de nuevos medicamentos que tratan de resolver estos<br />problemas. Siguiendo esta idea, este trabajo ha explorado el péptido antibacteriano<br />AS-48, producido por Enterococcus faecalis, cuya diana es la membrana bacteriana<br />y, además, es activo contra varias bacterias grampositivas. Se ha demostrado que<br />AS-48 tiene una acción bactericida contra M. tuberculosis, incluyendo H37Rv y<br />otras cepas clínicas y de referencia, también contra algunas especies<br />micobacterianas clínicas no tuberculosas. Cabe destacar el efecto sinérgico de la<br />combinación de AS-48 con lisozima o etambutol (comúnmente utilizado en el<br />tratamiento de la tuberculosis), dos compuestos que aumentan la acción<br />antimicrobiana de AS-48. En estas condiciones, AS-48 mata a M. tuberculosis a una<br />dosis más baja y muestra una CIM (Concentración Inhibitoria Mínima) cercana a<br />algunos de los agentes anti-TB de primera línea.<br />Además, se ha ensayado la citotoxicidad de AS-48 contra las líneas celulares<br />de macrófagos THP-1, MHS y J774, y se ha encontrado que a concentraciones<br />cercanas a la CIM de AS-48 no se pudo detectar ningún efecto citotóxico. La<br />actividad de AS-48 para inhibir el crecimiento de M. tuberculosis también se<br />observó dentro de los macrófagos infectados; en este modelo, también se observó<br />sinergia para las combinaciones de AS-48 y etambutol.<br />Se ha explorado el mecanismo de acción de la bacteriocina AS-48 contra M.<br />tuberculosis que muestra que AS-48 está afectando la membrana, que es una de las<br />dianas menos estudiadas, y que reduciría la aparición de nuevas cepas resistentes.<br />Además, algunos mecanismos relacionados con la aparición de cepas persistentes<br />parecen estar alterados después de tratar M. tuberculosis con AS-48. Se ha realizado<br />un análisis transcriptómico para comprender mejor el modo de acción AS-48.<br />Curiosamente, se ha demostrado que AS-48 también tiene como diana la<br />movilidad del ADN, probablemente afectando a otros procesos moleculares. Por<br />lo tanto, podemos considerar que AS-48 es un fármaco multidiana, y como tal, su<br />uso reduciría las probabilidades de desarrollar cepas mutantes resistentes.<br />Se han realizado estudios de toxicidad in vivo que muestran que la cepa<br />BALB/c es menos sensible a AS-48 que C57B/6. Los ensayos de toxicidad<br />subcrónica muestran que los ratones se mantienen saludables en tratamientos de<br />diez días con dosis de 2-1 mg/Kg de peso corporal de AS-48.<br />Sin embargo, en el ensayo de eficacia, AS-48 no muestra la actividad<br />antituberculosis observada en los ensayos in vitro; incluso junto con etambutol, no<br />demostró reducir la carga bacteriana en ratones infectados con M. tuberculosis.<br />En resumen, este trabajo revela algunos aspectos positivos de AS-48<br />(actividad antimicrobiana, baja toxicidad, sinergismo con etambutol) pero también<br />otros aspectos que tienen que mejorarse (ausencia de actividad in vivo o más bien<br />alta toxicidad). Así más trabajos y refinamientos son necesarios para poder<br />presentar a AS-48 como un candidato terapéutico contra tuberculosis.<br /> by-nc-nd Creative Commons 3.0 http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es <br /> 7073 Programa de Doctorado en Bioquímica y Biología Molecular microbiologia enfermedades pulmonares antibioticos bioquimica molecular AINSA CLAVER, JOSE ANTONIO dir. Universidad de Zaragoza Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública 485 tdr@unizar.es http://zaguan.unizar.es/record/79382/files/TESIS-2019-107.pdf Texto completo (eng) oai:zaguan.unizar.es:79382 driver tesis Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública TESIS