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000079498 1001_ $$aPolino, Mariella
000079498 24500 $$aIon-exchange membranes for protein crystallization and protein crystals derivatization
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000079498 4900_ $$aTesis de la Universidad de Zaragoza$$v2019-101$$x2254-7606
000079498 500__ $$aPresentado: 30 04 2019
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000079498 520__ $$aEsta tesis doctoral se centra en la aplicación de membranas de intercambio iónico para la cristalización de proteínas y la derivatización de cristales de proteínas. El trabajo experimental se divide en tres partes. La primera parte del trabajo se centra en la comprensión del efecto de la topografía en la nucleación. La softlitografía se utilizó para modificar la topografía superficial de las membranas Nafion® con diseños específicos, evitando así cambios en la química de la superficie que pueden enmascarar el efecto de la topografía en la nucleación. Las membranas impresas se caracterizaron por microscopia de fuerza atómica (AFM), microscopia electrónica de barrido (SEM) y ángulos de contacto, y se analizó la cristalización de tripsina de páncreas bovino. La nucleación y el crecimiento de los cristales se controlaron a lo largo del tiempo mediante el uso de microscopía óptica. Los resultados experimentales se compararon con los cálculos teóricos del ratio de la variación de la energía libre de Gibbs de nucleación heterogénea y homogénea. La segunda parte del trabajo se centró en una soft-derivatización<br />de cristales de proteínas utilizando membranas de intercambio iónico. Nafion® y Neosepta 01 se seleccionaron entre varias membranas por su capacidad de facilitar la nucleación. La cinética del transporte de iones para Br-, (PtCl2-) 4 y Hg2+ se evaluó para modelar el transporte en la celda de derivatización. La estabilidad de los cristales derivatizados por membranas de intercambio iónico a lo largo del tiempo fue comparada con la estabilidad de los cristales derivatizados por el método convencional de inmersión. Los cristales derivatizados con las membranas de intercambio iónico se analizaron mediante sincrotrón y la estructura de la proteína se resolvió con la técnica de reemplazo isomorfo. La tercera parte del trabajo consistió en la integración del concepto de derivatización con membranas de intercambio iónico en un microdispositivo de polidimetilsiloxano (PDMS). El microdispositivo se diseñó y construyó mediante las técnicas de fotolitografía y soft-lithography. La unión de la membrana al PDMS se realizó mediante grafting. Se realizaron la modelización del transporte de agua, NaCl y Hg2+ en el microdispositivo,<br />los experimentos de cristalización donde la sobresaturación se conseguió mediante ósmosis, y la evaluación de la calidad de difracción de los cristales se realizó.<br />
000079498 520__ $$a<br />
000079498 521__ $$97103$$aPrograma de Doctorado en Ingeniería Química y del Medio ambiente
000079498 6531_ $$aingenieria y tecnologia quimicas
000079498 700__ $$aMALLADA VIANA, REYES$$edir.
000079498 700__ $$aGOULAO CRESPO, JOAO PAULO$$edir.
000079498 700__ $$aGardeniers, Han$$edir.
000079498 7102_ $$aUniversidad de Zaragoza$$bIngeniería Química y Tecnologías del Medio Ambiente
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