Implicación de la NOX5 en la acción antioxidante y sobre la capacitación de la melatonina en los espermatozoides

Pina Beltrán, Blanca
Casao Gascón, Adriana (dir.) ; Gimeno Martos, Silvia (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2019
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Bioquímica y Biología Molecular

Graduado en Biotecnología

Resumen: Las especies reactivas de oxígeno (ROS) juegan un papel muy importante en el proceso de capacitación de los espermatozoides de mamífero. Una de las enzimas involucradas en la producción de ROS en el espermatozoide es la NADPH oxidasa 5 (NOX5). Por otro lado, la melatonina es una hormona capaz de disminuir los niveles de ROS en las células, y regular la actividad de NOX en células somáticas. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue identificar la NOX5 en el espermatozoide ovino y analizar la acción de la melatonina sobre esta enzima.
Para ello, se seleccionaron espermatozoides libres de plasma seminal mediante el método Swim-up y NOX5 se identificó mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) y Western Blot tras poner a punto los protocolos.Posteriormente, los espermatozoides seleccionados por Swim-up se incubaron durante 3 horas en condiciones capacitantes (39 °C y 5% de CO2) en un medio TALP o un medio TALP con sustancias potenciadoras de la capacitación (Cocktail), con y sin melatonina 1 µM. Tras la incubación se evaluó motilidad, viabilidad, estado de capacitación y especies reactivas de oxígeno. Además, para determinar un posible efecto de la melatonina sobre NOX5, se evaluó la distribución de NOX5 mediante IFI y se cuantificó por densitometría tras Western Blot.
Los resultados demostraron la presencia de NOX5 en el espermatozoide ovino, con la identificación mediante Western Blot de una banda de 85 kDa, compatible con el peso molecular de esta enzima. Además, la IFI rebeló la presencia de 6 inmunotipos distintos en estas células, con marcaje en la pieza intermedia, acrosoma, zona apical, zona apical y postacrosomal, acrosoma y postacrosoma o sólo postacrosoma. Asimismo, la capacitación en medio TALP y Cocktail produjo una variación en el porcentaje de los distintos inmunotipos para NOX5 con respecto a la muestra Swim-up, mientras que la incubación con melatonina revirtió el porcentaje de los distintos inmunotipos a niveles similares a los de la muestra inicial. Sin embargo, no se observaron diferencias significativas en el análisis densitométrico tras la capacitación, y la melatonina sólo disminuyó el porcentaje de células con bajos niveles de ROS en el medio TALP.
En conclusión, NOX5 está presente en el espermatozoide ovino, y la melatonina en condiciones capacitantes afecta a la distribución pero no a la concentración de esta enzima.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado