| TAZ-TFG-2020-1931 |
Caracterización de los factores y primeros eventos de malplegamiento en la agregación amiloide de α-sinucleína.
Tarancón Diez, Jorge
Cremades Casasín, Nunilo (dir.) ; Gracia Gonzalez, Pablo Jose (dir.)
Universidad de Zaragoza,
CIEN,
2020
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Bioquímica y Biología Molecular
Graduado en Biotecnología
Resumen: La α-sinucleína es una proteína muy estudiada por su implicación en enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Parkinson. La agregación amiloide de esta proteína está relacionada con la toxicidad neuronal que conlleva la aparición de estas enfermedades, pero, pese a los estudios sobre el tema, todavía se desconocen los factores y los mecanismos que median su agregación. Parte de este desconocimiento se debe a la falta de condiciones experimentales in vitro que emulen lo que sucede in vivo. Parece ser que la agregación de α-sinucleína se favorece en el interior o la superficie de condensados celulares (los denominados orgánulos sin membrana) que se generan en las neuronas en condiciones de estrés.
Este trabajo estudia, a modo preliminar, el comportamiento de α-sinucleína en diferentes microambientes resultado de un proceso de separación de fases líquido-líquido in vitro. Como primer paso para ello se caracterizó la formación y morfología de dos tipos de coacervados en función de la salinidad y la temperatura. Para ello se usaron técnicas de turbidimetría y microscopía diferencial de contraste de interferencia (DIC). A estos coacervados ya formados se les añadió α-sinucleína recombinante purificada, de la que parte era proteína marcada fluorescentemente a fin de evaluar por microscopía de fluorescencia el comportamiento de α-sinucleína. Se observó que la α-sinucleína parecía particionar preferentemente en coacervados artificiales in vitro con una carga neta ligeramente negativa. Este primer hallazgo abre la puerta a futuros estudios de agregación amiloide y cinéticas de agregación en modelos in vitro, más cercanos a las condiciones fisiológicas neuronales reales que los ensayos in vitro anteriores.
Este trabajo estudia, a modo preliminar, el comportamiento de α-sinucleína en diferentes microambientes resultado de un proceso de separación de fases líquido-líquido in vitro. Como primer paso para ello se caracterizó la formación y morfología de dos tipos de coacervados en función de la salinidad y la temperatura. Para ello se usaron técnicas de turbidimetría y microscopía diferencial de contraste de interferencia (DIC). A estos coacervados ya formados se les añadió α-sinucleína recombinante purificada, de la que parte era proteína marcada fluorescentemente a fin de evaluar por microscopía de fluorescencia el comportamiento de α-sinucleína. Se observó que la α-sinucleína parecía particionar preferentemente en coacervados artificiales in vitro con una carga neta ligeramente negativa. Este primer hallazgo abre la puerta a futuros estudios de agregación amiloide y cinéticas de agregación en modelos in vitro, más cercanos a las condiciones fisiológicas neuronales reales que los ensayos in vitro anteriores.
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado
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