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Estudio Epidemiológico y funcional de variantes en el gen GLA, en pacientes con miocardiopatía hipertrófica de ventrículo izquierdo de origen desconocido

Cebolla Sanz, Jorge Javier
Gervas Arruga, Javier (dir.) ; Pocovi Mieras, Miguel (dir.)

Universidad de Zaragoza, 2019

Resumen: La enfermedad de Fabry (EF) es una patología lisosomal ligada al cromosoma X, debida al acúmulo de lípidos complejos (globotriaosilceramida principalmente) por un déficit de la enzima α-galactosidasa A (α-Gal A). La incidencia varía en los estudios de hipertrofia de ventrículo izquierdo (HVI). El objetivo es analizar la incidencia de la EF en pacientes con HVI de origen desconocido y realizar el estudio molecular y epidemiológico de las variantes genéticas identificadas. Se llevó a cabo un estudio multicéntrico seguido de una valoración transversal de las historias clínicas. Se determinó la α-Gal A en muestra de gota de sangre seca. Todas las mujeres, y los varones cuya α-Gal A normalizada≤70%, se les analizó el gen GLA mediante electroforesis capilar. Los pacientes en los que se identificaron variantes genéticas fueron más ampliamente estudiados. Se estudiaron 367 sujetos. El patrón de HVI más común fue el concéntrico (42%). Se secuenciaron todas las mujeres y el 26,9% de los varones, identificándose variantes en ambos géneros (11,4% mujeres; 4,9% varones): NP_000160.1:p.Ser126Gly relacionada con actividad residual, el alelo de pseudo-deficiencia NP_000160.1:p.Asp313Tyr y 3 variantes de significado incierto (VSI). 49 pacientes mostraron variantes en el promotor y/o intrones. Tras el análisis in silico de las 3 VSI, la variante NM_000169.2:c.192C>T se consideró como potencialmente patogénica, aun así, se realizó caracterización funcional de las 3 VSI mediante determinación de actividad enzimática en plasma y extracto leucocitario, estudio de grandes reordenamientos génicos, estudio de EMSA, estudio de transcritos alternativos mediante electroforesis y cuantificación de marcadores biológicos subrogados en plasma y orina. Los resultados obtenidos de estos estudios no permitieron confirmar la patogenicidad de ninguna de las 3 VSI, incluso de NM_000169.2:c.192C>T a pesar de los resultados obtenidos in silico. Se realizó un estudio de segregación haplotípica para el resto de variantes identificadas en el estudio genético, estableciendo como mayoritarios 3 haplotipos compuestos por variantes en regiones no codificantes (haplotipo complejo intrónico, HCI). Previa a la caracterización funcional de los HCI se realizó un estudio de asociación estadística de todos los marcadores genéticos que formaban parte de los HCI vs la actividad α-Gal A en gota de sangre seca; una vez se realizó este estudio, se procedió a caracterizar funcionalmente los HCI mediante determinación de actividad enzimática en plasma y extracto leucocitario, estudio de grandes reordenamientos génicos, secuenciación de regiones no codificantes del gen GLA, estudio de EMSA, estudio de transcritos alternativos mediante electroforesis, estudio de la expresión génica, cuantificación de marcadores biológicos subrogados en plasma y orina y cuantificación del acúmulo intracelular de sustratos mediante técnicas de inmunohistoquímica. Los resultados obtenidos de estos estudios indicaron que tan solo el HCI tipo I mostró una reducción significativa de la actividad α-Gal A en gota de sangre seca. Se identificaron nuevos marcadores genéticos en regiones intrónicas profundas tanto en HCI tipo I como tipo III. No se observó niveles elevados de biomarcadores en plasma y orina. No se identificaron reordenamientos patogénicos en el gen GLA. La actividad enzimática de α-Gal A en extracto leucocitario se encontraba significativamente reducida en los pacientes con HCI tipo I, observándose también en ellos una reducción de la expresión del gen GLA y un acúmulo intracelular de manera difusa de globotriaosilceramida a partir de los estudios realizados en cultivo primario de fibroblastos. La incidencia de la EF en nuestro estudio fue nula, sin embargo, se identificaron 3 VSI y varios HCI. El HCI tipo I mostró una reducción significativa de la actividad enzimática, regulación a la baja de la expresión del gen GLA y acúmulo intracelular de sustrato.

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