| TAZ-TFM-2022-400 |
Estrategia de terapia génica para el tratamiento de la Hepatoencefalopatía COXPD1
PERTA, ADELINA MIRUNA
Bayona Bafaluy, María Pilar (dir.)
Universidad de Zaragoza,
CIEN,
2022
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Bioquímica y Biología Molecular
Máster en Biología Molecular y Celular
Resumen: La Hepatoencefalopatía por deficiencia combinada de fosforilación oxidativa tipo 1
(COXPD1) es una enfermedad mitocondrial causada por una mutación en el gen
GFM1 que codifica para el factor de elongación G1 (EFG1). Se trata de un factor de
esencial para la síntesis de proteínas mitocondriales. Así, defectos en el mismo
pueden desencadenar un trastorno multisistémico, de inicio precoz, que generalmente
provoca la muerte de los pacientes en los primeros meses/años de vida, y dificulta el
estudio de la enfermedad y consecuentemente su tratamiento. Es por ello que en los
últimos años la investigación se ha dedicado al desarrollo de modelos animales de
COXPD1 que reproduzcan el fenotipo de los pacientes. La generación de ratones Wt
(Gfm1+/+), Ki (Gfm1R671C/R671C) y Ki/K0 (Gfm1R671c/-) ha sentado las bases para el inicio
de nuevos ensayos de terapia génica. Por lo tanto, el presente estudio busca
desarrollar una estrategia basada en la edición de genes con el sistema CRISPR/Ca9,
que permita la corrección eficiente de la mutación c.2011C>T por su amplia presencia
en pacientes y su relación con una mayor supervivencia. Requiriendo una extensa
etapa de caracterización del fenotipo de los fibroblastos embrionarios obtenidos de los
ratones modelo, seguido de un estudio exhaustivo de las mejores condiciones de
diseño CRISPR y las condiciones de manipulación más adecuadas para la línea
celular diana, y finalizando con la puesta a punto de protocolos apropiados. También
fue posible caracterizar las necesidades metabólicas en presencia de la mutación
R671C, desarrollar una estrategia de selección basada en la competencia celular para
facilitar el aislamiento de los clones después de la edición, e incluso determinar
comportamientos de respuesta adaptativa llamativos.
(COXPD1) es una enfermedad mitocondrial causada por una mutación en el gen
GFM1 que codifica para el factor de elongación G1 (EFG1). Se trata de un factor de
esencial para la síntesis de proteínas mitocondriales. Así, defectos en el mismo
pueden desencadenar un trastorno multisistémico, de inicio precoz, que generalmente
provoca la muerte de los pacientes en los primeros meses/años de vida, y dificulta el
estudio de la enfermedad y consecuentemente su tratamiento. Es por ello que en los
últimos años la investigación se ha dedicado al desarrollo de modelos animales de
COXPD1 que reproduzcan el fenotipo de los pacientes. La generación de ratones Wt
(Gfm1+/+), Ki (Gfm1R671C/R671C) y Ki/K0 (Gfm1R671c/-) ha sentado las bases para el inicio
de nuevos ensayos de terapia génica. Por lo tanto, el presente estudio busca
desarrollar una estrategia basada en la edición de genes con el sistema CRISPR/Ca9,
que permita la corrección eficiente de la mutación c.2011C>T por su amplia presencia
en pacientes y su relación con una mayor supervivencia. Requiriendo una extensa
etapa de caracterización del fenotipo de los fibroblastos embrionarios obtenidos de los
ratones modelo, seguido de un estudio exhaustivo de las mejores condiciones de
diseño CRISPR y las condiciones de manipulación más adecuadas para la línea
celular diana, y finalizando con la puesta a punto de protocolos apropiados. También
fue posible caracterizar las necesidades metabólicas en presencia de la mutación
R671C, desarrollar una estrategia de selección basada en la competencia celular para
facilitar el aislamiento de los clones después de la edición, e incluso determinar
comportamientos de respuesta adaptativa llamativos.
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master
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