Estudio de superficies de biorreconocimiento de ocratoxina A en el desarrollo de una plataforma multisensora electroquimica para micotoxinas

Cubel Sánchez, Carlota
Castillo Suárez, Juan Ramón (dir.) ; Bonel Sanmartín, Laura (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2013
Química Analítica department, Química Analítica area

Máster Universitario en Investigación Química

Abstract: La ocratoxina A (OTA) es una micotoxina producida por ciertas especies de hongos Aspergillus o Penicillium en una serie de alimentos y presenta actividad nefrotóxica, teratogénica, carcinogénica e inmunotóxica que afecta tanto a animales como a humanos. Se encuentra presente en numerosos tipos de alimentos como vino, mosto, frutos secos, cerveza, trigo, etc. Las principales vías de incorporación son a través de la ingestión, inhalación y absorción a través de la piel. Debido a estos efectos toxicológicos, la legislación internacional en referencia a la OTA es extremadamente restrictiva y cada vez más exigente. Los contenidos máximos permitidos de OTA en diferentes alimentos y piensos están en los niveles de ng g-1. Se va a llevar a cabo el estudio de diferentes elementos de biorreconocimiento mediante la técnica espectrofotométrica ELISA. Los estudios que se llevan a cabo son mediante dos esquemas de trabajo diferente, esquema competitivo directo donde el elemento de biorreconocimiento es inmovilizado sobre la superficie de las partículas magnéticas o mediante un esquema competitivo indirecto en el cual es el analito objeto de estudio es el que se une a las partículas magnéticas. Las partículas mejoran considerablemente el rendimiento de la reacción inmunológica debido a una rápida cinética de inmunoensayo ya que las partículas se encuentran en suspensión, facilitando además los protocolos de lavado y separación. Durante el ensayo se llevan a cabo etapas de lavado y separación con la ayuda de un separador magnético evitándose adsorciones inespecíficas o interferencias de matriz sobre la superficie de la placa ELISA, posteriormente se lleva a cabo la etapa de competición entre la OTA y la OTA marcada con la enzima peroxidasa (HRP), ésta última compite con la primera por los sitios de unión libres del elemento de biorreconocimiento. La reacción enzimática se lleva a cabo mediante el uso de 3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina (TMB) en un tiempo de 20 minutos y una posterior medida de absorbancia a una longitud de onda de 450 nm. Complementariamente a estos ensayos se recurre a otras técnicas espectroscópicas (SPR, fluorescencia y absorción UV-Vis) que nos permitan estudiar tanto el grado de inmovilización sobre las partículas magnéticas como las posibles reacciones de afinidad entre el elemento de biorreconocimiento y el analito.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master