| TAZ-TFG-2023-2695 |
Purificación y caracterización del regulador transcripcional All1651 de la cianobacteria Anabaena sp. PCC7120
Sánchez Atrián, Gabriel
Sevilla Miguel, Emma (dir.) ; Bes Fustero, María Teresa (dir.) ; Guío Martínez, Jorge (dir.)
Universidad de Zaragoza,
CIEN,
2023
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular,
Graduado en Biotecnología
Resumen: Las cianobacterias son microorganismos procariotas fotosintéticos cuyo estudio es de gran interés, debido a su importancia ecológica y sus numerosas aplicaciones biotecnológicas. Uno aspecto crucial en la fisiología de estos organismos es el mantenimiento de la homeostasis de metales, que en la
mayoría de procariotas está controlado por la familia de reguladores transcripcionales FUR (Ferric Uptake Regulator). La cianobacteria Anabaena sp. PCC7120 presenta tres parálogos de proteínas FUR, FurA, FurB y FurC, los cuales, además de la homeostasis de metales, controlan diversos procesos celulares, como la fotosíntesis o el metabolismo del nitrógeno, actuando como reguladores globales. Recientemente, se ha descrito que los reguladores FUR en Anabaena sp. PCC 7120 son capaces de regular la expresión de reguladores transcripcionales, sistemas de dos componentes o factores sigma, orquestando redes de regulación transcripcional que les permitirían controlar muchos procesos celulares de forma indirecta.
En este trabajo se ha llevado a cabo la caracterización y purificación del regulador transcripcional All1651, el cual está regulado tanto por FurA como por FurC. Para ello se han realizado estudios bioinformáticos que ha permitido identificar su familia y dominios y conocer sus propiedades
fisicoquímicas. Por otro lado, se han optimizado las condiciones de sobreexpresión de esta proteína en E. coli y se ha establecido un protocolo de purificación del regulador mediante el uso de cromatografía por afinidad a iones metálicos (IMAC). Finalmente, se ha estudiado su actividad de
unión al DNA in vitro mediante ensayos de retardo en gel (EMSA).
mayoría de procariotas está controlado por la familia de reguladores transcripcionales FUR (Ferric Uptake Regulator). La cianobacteria Anabaena sp. PCC7120 presenta tres parálogos de proteínas FUR, FurA, FurB y FurC, los cuales, además de la homeostasis de metales, controlan diversos procesos celulares, como la fotosíntesis o el metabolismo del nitrógeno, actuando como reguladores globales. Recientemente, se ha descrito que los reguladores FUR en Anabaena sp. PCC 7120 son capaces de regular la expresión de reguladores transcripcionales, sistemas de dos componentes o factores sigma, orquestando redes de regulación transcripcional que les permitirían controlar muchos procesos celulares de forma indirecta.
En este trabajo se ha llevado a cabo la caracterización y purificación del regulador transcripcional All1651, el cual está regulado tanto por FurA como por FurC. Para ello se han realizado estudios bioinformáticos que ha permitido identificar su familia y dominios y conocer sus propiedades
fisicoquímicas. Por otro lado, se han optimizado las condiciones de sobreexpresión de esta proteína en E. coli y se ha establecido un protocolo de purificación del regulador mediante el uso de cromatografía por afinidad a iones metálicos (IMAC). Finalmente, se ha estudiado su actividad de
unión al DNA in vitro mediante ensayos de retardo en gel (EMSA).
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado
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