Macías León , Javier
Hurtado Guerrero, Ramón (dir.)
Universidad de Zaragoza,
2022
Resumen: Esta tesis doctoral está enfocada en dos aplicaciones distintas del uso de fragmentos de anticuerpos.
En primer lugar hemos caracterizado las bases moleculares de la interacción entre el scFv-5E5 y su antígeno, unos motivos presentes en las proteínas MUC1 truncadas que se expresan en diversas células tumorales. Mediante difracción de rayos X hemos determinado que el scFv-5E5 reconoce principalmente el residuo de GalNAc (o antígeno Tn) del motivo APGST(Tn)AP, y además interacciona con dos residuos de la cadena peptídica, lo que otorga cierta promiscuidad al anticuerpo. Además, hemos estudiado la especificidad del sustrato determinando que solo reconoce efectivamente el motivo T(Tn)-X-P, siendo X cualquier aminoácido.
En segundo lugar hemos desarrollado nanobodies frente a la enzima Gel4, una de las ß-1,3-glucanosiltransferasas de Aspergillus fumigatus responsables de la remodelación de la capa de ß-1,3-glucanos de la pared celular, con el objetivo de explorar su eficacia para combatir infecciones fúngicas invasivas (enfermedades que matan en torno a 1.6 millones de personas al año). Al caracterizar la estructura cristalina de los complejos de Gel4 con dos de estos nanobodies (Nb3 y Nb4) descubrimos que se unen a zonas distintas de la proteína, uniéndose el Nb4 al dominio CBM43 y el Nb3 al dominio catalítico, que presenta una mayor conservación en ortólogos de la proteína. Además, se realizaron ensayos de supervivencia en gusanos y ratones para estudiar la protección ofrecida por el Nb3, mostrando supervivencias de hasta más del 80% dependiendo de la dosis administrada en ambos animales. Estos resultados demuestran que el Nb3 exhibe un papel protector contra diversos patógenos fúngicos y proporciona una posible estrategia para combatir estas enfermedades fúngicas invasivas.
Resumen (otro idioma):
En primer lugar hemos caracterizado las bases moleculares de la interacción entre el scFv-5E5 y su antígeno, unos motivos presentes en las proteínas MUC1 truncadas que se expresan en diversas células tumorales. Mediante difracción de rayos X hemos determinado que el scFv-5E5 reconoce principalmente el residuo de GalNAc (o antígeno Tn) del motivo APGST(Tn)AP, y además interacciona con dos residuos de la cadena peptídica, lo que otorga cierta promiscuidad al anticuerpo. Además, hemos estudiado la especificidad del sustrato determinando que solo reconoce efectivamente el motivo T(Tn)-X-P, siendo X cualquier aminoácido.
En segundo lugar hemos desarrollado nanobodies frente a la enzima Gel4, una de las ß-1,3-glucanosiltransferasas de Aspergillus fumigatus responsables de la remodelación de la capa de ß-1,3-glucanos de la pared celular, con el objetivo de explorar su eficacia para combatir infecciones fúngicas invasivas (enfermedades que matan en torno a 1.6 millones de personas al año). Al caracterizar la estructura cristalina de los complejos de Gel4 con dos de estos nanobodies (Nb3 y Nb4) descubrimos que se unen a zonas distintas de la proteína, uniéndose el Nb4 al dominio CBM43 y el Nb3 al dominio catalítico, que presenta una mayor conservación en ortólogos de la proteína. Además, se realizaron ensayos de supervivencia en gusanos y ratones para estudiar la protección ofrecida por el Nb3, mostrando supervivencias de hasta más del 80% dependiendo de la dosis administrada en ambos animales. Estos resultados demuestran que el Nb3 exhibe un papel protector contra diversos patógenos fúngicos y proporciona una posible estrategia para combatir estas enfermedades fúngicas invasivas.
Resumen (otro idioma):
Pal. clave: hongos ; anticuerpos ; marcadores tumorales ; estructura de la pared celular
Titulación: Programa de Doctorado en Bioquímica y Biología Molecular
Plan(es): Plan 485
Área de conocimiento: Ciencias
Nota: Presentado: 12 12 2022
Nota: Tesis-Univ. Zaragoza, , 2022
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