Obtención de diamino oxidasas de plantas mediante tecnologías recombinantes

Chicano Pablo, Iván
Jarne Lardiés, Carmen (dir.) ; Alfonso Lozano, Miguel (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2024

Graduado en Biotecnología

Resumen: Las diamino oxidasas (DAO) son un grupo de proteínas ampliamente distribuido en las especies, tanto en el reino animal, como en el vegetal y bacteriano, implicadas en varios procesos celulares (síntesis de alcaloides, producción de NO (óxido nitroso) y ROS (especies reactivas de oxígeno)). Esta enzima cataliza la producción de un aldehído a partir de una amina primaria, con la liberación de peróxido de hidrógeno. Entre las posibles aplicaciones biotecnológicas, la que suscita más interés es la capacidad oxidativa de putrescina y cadaverina. Se tratan de aminas biogénicas que se producen junto a la histamina y otras en la hidrólisis de proteínas durante la putrefacción de tejidos. Datos preliminares sugieren que las diamino oxidasas de soja (Glycine max) parecen tener cierta selectividad frente a uno de estos sustratos. Por tanto, se planteó, como paso previo a la obtención recombinante del enzima, caracterizar a nivel genético y molecular las diamino oxidasas de soja.
El estudio del genoma de soja mostró la existencia de al menos 6 genes diferentes que codifican proteínas compatibles con las DAO. Estas proteínas mostraron diferente localización cromosómica y alto grado de homología, con elevado parentesco con respecto a las DAO de otras especies vegetales de secuencia accesible. El análisis de la expresión mediante RT-PCR en plantas etioladas de soja mostró un patrón de expresión característico para cada isoforma GmDAO en los diferentes tejidos analizados. GmDAO5 se expresó específicamente en los cotiledones mientras que GmDAO4 se expresó específicamente en la raíz. GmDAO1, GmDAO2 y GmDAO5 se expresaron abundantemente en hojas. Estas diferencias en los niveles de expresión podrían estar detrás de las diferencias en la afinidad por sustrato obtenidas en la actividad DAO de extractos de soja.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Grado