Modelo hepático de isquemia-reperfusión in vivo aplicado al estudio de la fluidez de las membranas biológicas

Esteban Zubero, Eduardo
García García, José Joaquín (dir.) ; Ramos Fuentes, Feliciano Jesús (dir.)

Universidad de Zaragoza, MED, 2014
Departamento de Farmacología y Fisiología,

Máster Universitario en Condicionantes Genéticos, Nutricionales y Ambientales del Crecimiento y Desarrollo

Resumen: Introducción: Las lesiones de isquemia-reperfusión (IR) son una de las complicaciones más frecuentes en Cirugía y uno de los motivos más frecuentes de rechazo de trasplante de órganos. Entre los mecanismo fisiopatológicos del daño por IR, destaca la generación de grandes cantidades de radicales libres durante la reperfusión. De ahí que, en la actualidad, se proponga el uso de antioxidantes para reducir esta lesión. Estos radicales libres pueden producir alteraciones estructurales y funcionales en las membranas celulares. En el actual trabajo se presentan resultados preliminares en relación a las alteraciones del daño de IR a nivel de la fluidez de membrana celular y mitocondrial. El objetivo de este trabajo es analizar analizar los efectos del daño por isquemia-reperfusión sobre la fluidez de membranas celulares y mitocondriales aisladas a partir de tejido hepático de la rata en un modelo de isquemia-reperfusión in vivo. Material y métodos: Se utilizaron ratas macho Sprague-Dawley con un peso medio de 200 ± 15 g. y de 3 meses de edad distribuidas en tres grupos: control, isquemia e isquemia-reperfusión (n=4). El modelo de IR consistió en el clampaje de la vena porta con una pinza tipo bulldog durante 15 minutos seguido de reperfusión durante 30 minutos. Los controles se soetieron a una operación simulada de las mismas características salvo en el clampaje. Se obtuvieron muestras del lóbulo izquierdo hepático donde se analizaron membranas celulares y mitocondriales por centrifugación y se realizó la medición de su fluidez por espectrografía de fluorescencia, utilizando el 1-(4-trimetilamoniofenil)-6-fenil-1,3,5-hexatrieno-p-tolueno sulfonato (TMA-DPH) como marcador. Los resultados se trataron estadísticamente aplicando el test de la t de Student para datos no pareados. Resultados y discusión: La fluidez de las membranas celulares descendió significativamente en los animales del grupo de isquemia-reperfusión, sin embargo, no hubo cambios significativos entre los controles y el grupo de isquemia (Membranas: Control: 3’01±0’05; Isquemia: 3’12±0’14; Isquemia-reperfusión: 2’92±0’04). En la membrana mitocondrial los valores más bajos de fluidez también se detectaron en el grupo de isquemia-reperfusión aunque el descenso no fue significativo (Mitocondria: Control: 2’98±0’06); Isquemia: 3’05±0’07; Isquemia-reperfusión: 2’92±0’03). Estos datos concuerdan con los resultados ya vistos en la literatura, por lo que se puede inferir que el daño debido a la reperfusión vascular en los injertos se caracteriza por una reducción en la fluidez de membrana. Los descensos de la fluidez pueden explicarse por los efectos de la sobreproducción de radicales libres durante la reperfusión, ya que éstos provocan cambios en la composición química de la bicapa celular, con un descenso de la relación de ácidos grasos poliinsaturados/saturados, y la formación de uniones cruzadas entre lípidos y proteínas. Podemos concluir que el modelo de isquemia-reperfusión hepática en rata utilizado en esta investigación es muy útil para el estudio del papel terapéutico potencial de la melatonina, sobre el que cursaré mis estudios de Doctorado. Los resultados que se obtengan contribuirán a reducir en lo posible los efectos nocivos derivados de la isquemia-reperfusión al preservar las funciones de las membranas celulares y mitocondriales en situaciones clínicas como el trasplante de órganos

Palabra(s) clave (del autor): estrés oxidativo ; radicales libres ; melatonina ; fluidez de membrana

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master