Generación de una línea celular que exprese Sinaptotagmina 1

Palau Irisarri, Pablo
Osada García, Jesús (dir.) ; Herrera Marcos, Luis Vte. (dir.) ; Rodríguez Yoldi, María Jesús (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2017
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Biología Celular

Máster en Biología Molecular y Celular

Resumen: El sistema de edición génica CRISPR/Cas9 ha originado una revolución en el ámbito científico en los últimos años, compuesto por la nucleasa Cas9 y una guía RNA de 20 nucleótidos, produce un corte de doble hebra dirigido en el DNA de cualquier organismo. La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) es la forma más común de las enfermedades hepáticas, llegando a tener una prevalencia superior a un 25% en algunos grupos étnicos en la sociedad occidental. A pesar de que su prevalencia va en aumento, los mecanismos moleculares desencadenantes por los cuales el hígado se vuelve esteatósico siguen sin aclararse. Miembros del grupo encontraron asociación entre la expresión de Sinaptotagmina 1 (Syt1), una proteína vesicular involucrada en procesos de endo/exocitosis en tejidos neuroendocrinos y la esteatosis hepática. En el presente trabajo se emplea el sistema CRISPR/Cas9 para generar dos poblaciones diferenciadas a partir de las células hepáticas cancerígenas humanas HepG2. La primera población presenta una sobreexpresión de Syt1, gracias a la co-transfección de los plásmidos DONOR-Syt1 y AAVS1 sgRNA/Cas9. La segunda población expresa un silenciamiento génico de SYT1, originado por la co-transfección de los plásmidos DONOR-Syt1 reverse y AAVS1 sgRNA/Cas9. Se siguieron diferentes métodos para el diseño de ambas construcciones plasmídicas, usando correspondientemente la técnica de clonaje clásica y el clonaje por recombinación. Los exámenes fenotípicos de las poblaciones resultantes de este trabajo servirán para dar un paso más en el camino hacia la comprensión de los mecanismos moleculares de la EHGNA.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master