000063591 001__ 63591 000063591 005__ 20171221155139.0 000063591 037__ $$aTAZ-TFM-2017-1338 000063591 041__ $$aspa 000063591 1001_ $$aPalau Irisarri, Pablo 000063591 24200 $$aGeneration of a cell line that expresses Sinaptotagmina 1 000063591 24500 $$aGeneración de una línea celular que exprese Sinaptotagmina 1 000063591 260__ $$aZaragoza$$bUniversidad de Zaragoza$$c2017 000063591 506__ $$aby-nc-sa$$bCreative Commons$$c3.0$$uhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/ 000063591 520__ $$aEl sistema de edición génica CRISPR/Cas9 ha originado una revolución en el ámbito científico en los últimos años, compuesto por la nucleasa Cas9 y una guía RNA de 20 nucleótidos, produce un corte de doble hebra dirigido en el DNA de cualquier organismo. La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) es la forma más común de las enfermedades hepáticas, llegando a tener una prevalencia superior a un 25% en algunos grupos étnicos en la sociedad occidental. A pesar de que su prevalencia va en aumento, los mecanismos moleculares desencadenantes por los cuales el hígado se vuelve esteatósico siguen sin aclararse. Miembros del grupo encontraron asociación entre la expresión de Sinaptotagmina 1 (Syt1), una proteína vesicular involucrada en procesos de endo/exocitosis en tejidos neuroendocrinos y la esteatosis hepática. En el presente trabajo se emplea el sistema CRISPR/Cas9 para generar dos poblaciones diferenciadas a partir de las células hepáticas cancerígenas humanas HepG2. La primera población presenta una sobreexpresión de Syt1, gracias a la co-transfección de los plásmidos DONOR-Syt1 y AAVS1 sgRNA/Cas9. La segunda población expresa un silenciamiento génico de SYT1, originado por la co-transfección de los plásmidos DONOR-Syt1 reverse y AAVS1 sgRNA/Cas9. Se siguieron diferentes métodos para el diseño de ambas construcciones plasmídicas, usando correspondientemente la técnica de clonaje clásica y el clonaje por recombinación. Los exámenes fenotípicos de las poblaciones resultantes de este trabajo servirán para dar un paso más en el camino hacia la comprensión de los mecanismos moleculares de la EHGNA. 000063591 521__ $$aMáster en Biología Molecular y Celular 000063591 540__ $$aDerechos regulados por licencia Creative Commons 000063591 700__ $$aOsada García, Jesús$$edir. 000063591 700__ $$aHerrera Marcos, Luis Vte.$$edir. 000063591 700__ $$aRodríguez Yoldi, María Jesús$$edir. 000063591 7102_ $$aUniversidad de Zaragoza$$bBioquímica y Biología Molecular y Celular$$cBiología Celular 000063591 8560_ $$f633119@celes.unizar.es 000063591 8564_ $$s5335716$$uhttps://zaguan.unizar.es/record/63591/files/TAZ-TFM-2017-1338.pdf$$yMemoria (spa) 000063591 909CO $$ooai:zaguan.unizar.es:63591$$pdriver$$ptrabajos-fin-master 000063591 950__ $$a 000063591 951__ $$adeposita:2017-12-21 000063591 980__ $$aTAZ$$bTFM$$cCIEN