Staphylococcus lugdunensis: Fenotipos y Genotipos de resistencia a antibióticos, producción y caracterización de sustancias antimicrobianas

Fernández Fernández, Rosa
Torres Manrique, Carmen (dir.)

AÍNSA CLAVER, JOSÉ ANTONIO (ponente)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2018
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Bioquímica y Biología Molecular

Máster en Biología Molecular y Celular

Resumen: RESUMEN Staphylococcus lugdunensis (SL) es un microorganismo de gran interés en el ámbito clínico como patógeno oportunista, y recientemente se ha descrito su interés en ecología microbiana debido a la producción de bacteriocinas por algunas cepas. En base a ello, en este Trabajo Fin de Máster se ha planteado como objetivo caracterizar una colección de 48 cepas clínicas de S. lugdunensis obtenidas durante 2013-2018 en dos hospitales españoles (Hospital San Pedro, Logroño (HSP) y Hospital Royo Villanova, Zaragoza (HRV)). En este estudio, se evaluó su fenotipo/genotipo de resistencia, su capacidad productora de compuestos antimicrobianos y los elementos genéticos asociados. Para ello, se identificaron las cepas por MALDI-TOF, se confirmó la sensibilidad a 8 antibióticos seleccionados (penicilina, meticilina/oxacilina, tetraciclina, eritromicina, clindamicina, gentamicina, tobramicina, mupirocina y fosfomicina) por el método de difusión disco-placa y se analizó por PCR/secuenciación la presencia de genes de resistencia asociados. En cuanto a la producción de bacteriocinas de las 48 cepas en estudio, se realizaron screenings por el método “Spot in the lawn” frente a 37 microorganismos indicadores, tanto bacterias Gram-positivas como Gram-negativas. Por último, se realizaron estudios por PCR/secuenciación del gen lugD, asociado a la producción de la bacteriocina lugdunina, descrita recientemente en la especie bacteriana S. lugdunensis. Se identificó un 60% de cepas resistentes al menos a uno de los antibióticos testados, siendo la penicilina (46%) y la fosfomicina (27%) los más frecuentes. Asimismo se comprobó que dichas cepas eran portadoras de los genes de resistencia asociados: penicilina (blaZ), meticilina/oxacilina (mecA, gen incluido en este caso en el elemento cromosómico SCCmec de tipo V), tetraciclina (tet(K)), mupirocina (mup(A)), eritromicina y clindamicina (erm(C) y/o msr(A)), tobramicina (ant4(4')-(4'')) y gentamicina (acc(6') - aph(2'')). En relación a la producción de bacteriocinas de la colección de las 48 cepas clínicas de S. lugdunensis, se hizo patente la presencia de 12 cepas altamente productoras, de las cuales 7 mostraron actividad inhibitoria frente a bacterias con diversos genotipos de resistencia de interés, incluyendo bacterias multi-resistentes y patógenos oportunistascomo: S. aureus SARM y SASM, vanA/vanB2 enterococci, Listeria monocytogenes y S. pseudintermedius SPRM y SPSM, entre otros. Una de estas cepas (C9954), producía una sustancia antimicrobiana activa frente al 70% de los microorganismos indicadores testados. Finalmente, la evaluación del gen lugD por PCR permitió confirmar su presencia en el 100% de las cepas de S. lugdunensis productoras de bacteriocinas y en 75% de las no productoras. Por secuenciación se confirmó la identidad de los amplicones y los análisis de las secuencias posteriores evidenciaron su semejanza con respecto a la de referencia (NC_017353.1).

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master