Optimización de la expresión de un receptor quimérico de antígeno (CAR) en células NK frente a células de cáncer colorrectal humano

Hidalgo Arizón, Sandra
Pardo Jimeno, Julián (dir.) ; Lanuza Morte, Pilar Mª (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2019
Departamento de Microbiología, Medicina Preventiva y Salud Pública, Área de Inmunología

Máster en Biología Molecular y Celular

Resumen: El cáncer colorrectal (CCR) es una patología que provoca la muerte de un gran número de personas en todo el mundo. El uso de células inmunológicas con potencial citotóxico, como las células NK, modificadas genéticamente mediante receptores quiméricos de antígeno (CARs), se ha propuesto como una buena alternativa para su tratamiento. En esta línea, el antígeno Tn de MUC1 puede ser una buena opción para el desarrollo de CARs dado que se encuentra en células tumorales y no en las sanas.
Las células NK se caracterizan por su difícil manipulación genética, por ello, el objetivo principal de esta investigación es optimizar de un protocolo de transfección lentiviral de células NK. Se ha establecido un método que logra eficiencias del 14-19%, de infección, como máximo, en la línea celular NK-92 con un gen reportero. No obstante, no se ha logrado la expresión exitosa de un CAR de 4ª generación anti-Tn de MUC1, probablemente debido a factores asociados con la propia construcción génica.
Asimismo, se han realizado experimentos adicionales para poder evaluar y caracterizar las futuras CAR-NK. En este sentido, con el objetivo de determinar la capacidad citotóxica adquirida por la expresión del CAR, se estudió la citotoxicidad de la línea NK-92 no transfectada frente a cultivos de CCR en 2D y 3D; mostrando resultados moderados en 2D y apenas efectividad en 3D
Por otra parte, se trató de caracterizar la expresión de MUC1 en cultivos 2D y 3D en diferentes células de CCR, pero sin éxito debido a las características de los anticuerpos utilizados. Por último, se evaluó la expresión de TGF-β en células de CCR, para, en un futuro, poder valorar la citotoxicidad de células CAR-NK modificadas con un segundo CAR diseñado contra esta citoquina.
En definitiva, aunque no se ha logrado la modificación genética de células NK con CARs, se han realizado avances tanto en la optimización de la producción e infección lentiviral, como en el desarrollo de experimentos de caracterización.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master