Escolar Miñana, Cristina
Rota García, María del Carmen (dir.) ; Conchello Moreno, María del Pilar (dir.)
Universidad de Zaragoza,
2022
Resumen: Los antimicrobianos son utilizados como tratamiento de mayor eficacia en la terapia médica de enfermedades infecciosas; sin embargo, su excesiva utilización y mal uso en medicina humana y veterinaria han derivado en que los microorganismos causantes adquieran mecanismos que les permitan resistir al efecto antimicrobiano de éstos. La resistencia antimicrobiana (RAM) es un problema global, de epidemiología compleja que implica a humanos, animales, alimentos y medio ambiente, y por lo tanto debe ser abordado desde el enfoque Una Sola Salud.
Los enterococos forman parte de la microbiota comensal de animales y humanos, y están presentes en múltiples nichos ecológicos incluido los alimentos. Su capacidad para adaptarse a situaciones adversas y para intercambiar material genético con otras bacterias, lo convierte en un indicador idóneo de la transferencia horizontal de material genético. Por ello, los estudios dirigidos a la tipificación y caracterización de Enterococcus spp., permiten determinar las rutas de transmisión de RAM entre el sector animal, medio ambiente y humano.
El objetivo de este trabajo ha sido evaluar la cadena alimentaria como entorno favorable para la transmisión y diseminación de resistencias antimicrobianas y exposición a genes de resistencia.
En primer lugar, se ha caracterizado fenotípica y genotípicamente la resistencia antimicrobiana en 80 aislados de Enterococcus spp. obtenidos del proceso de elaboración de queso artesano de leche cruda de oveja, en dos centros de producción diferentes. En general, E. faecalis y E. faecium fueron las especies más prevalentes; también se identificaron E. hirae, E. casseliflavus y E. durans. La técnica de difusión en disco ha permitido detectar resistencia al menos a un antibiótico de los 16 analizados en el 72 % de los aislados, con tasas altas de resistencia a tetraciclinas, macrólidos y aminoglucósidos; además, el 29 % de los aislados han presentado multirresistencia.
Mediante RT PCR se han analizado 19 genes de resistencia e identificado 10 genes diferentes en ADN plasmídico, relacionándose en la mayoría de los casos el patrón fenotípico con un mecanismo de resistencia adquirido. Los genes tet M, erm B y ant (6)-Ia, han estado presentes en el 50 %, 30 % y 25 % de los aislados, respectivamente. E. faecalis ha sido la especie que ha presentado las mayores tasas de RAM tanto a nivel fenotípico como genotípico, seguido de E. hirae y E. casseliflavus,mientras que E. faecium ha presentado únicamente resistencia in vitro a quinupristina/dalfopristina y ausencia de genes de RAM, y E. durans ha sido sensible a todos los antibióticos tanto a nivel fenotípico como genotípico.
En segundo lugar, la caracterización molecular ha permitido estudiar la dinámica poblacional de enterococos identificándose un total de 55 genotipos mediante RAPD PCR. Así mismo, mediante PFGE se han identificado 12 pulsotipos de E. faecalis y 6 de E. faecium, confirmando el importante papel que juegan los enterococos en el proceso de elaboración del queso. Los resultados han demostrado la utilidad de la técnica RAPD PCR como alternativa rápida, sencilla y económica para la caracterización molecular de Enterococcus spp. cuando se aplica bajo condiciones previamente optimizadas y controladas.
Por último, mediante el análisis MLST se ha estudiado la relación filogenética de los aislados de E. faecalis y E. faecium de origen lácteo con los de origen humano, animal y ambiental a nivel mundial.
E. faecalis ha presentado una elevada diversidad genética representada por 10 secuencias tipo, dos de las cuales (ST1056 y ST1057) se han identificado por primera vez a nivel mundial depositándose en la base de datos MLST. Los clones detectados se han asociado mayoritariamente al ambiente hospitalario (ST25, ST133, ST55, ST40, ST16, ST206, ST538), agrupándose 3 de ellos (ST538, ST16 y ST40) en complejos clonales de alto riesgo epidemiológico (CC2, CC16 y CC40, respectivamente). Los aislados clasificados en estos complejos clonales presentaron altas tasas de resistencia, codificada por los determinantes genéticos erm B (CC2), tet M y ant(6)-Ia (CC40) y lnu B, tet M, erm B, cat A, catp C221, ant(6)-Ia y aac(6¿)-Ie-aph(2¿)-Ia (CC16).
La tipificación por MLST permitió identificar un total de 5 secuencias tipo de E. faecium: ST47, ST1491, ST286, ST1853 y ST1854, las dos últimas detectadas por primera vez a nivel mundial. Los resultados han demostrado una escasa relación filogenética entre los aislados obtenidos del proceso de elaboración de queso y de otros orígenes epidemiológicos depositados en la base de datos MLST.
Por último, el análisis del proceso de elaboración de queso ha revelado que la leche cruda de oveja y el queso curado constituyen una vía de exposición a bacterias resistentes y genes de resistencia con implicaciones para la seguridad alimentaria y la salud pública.
En conclusión, el estudio molecular llevado a cabo en este trabajo ha permitido conocer la dinámica poblacional de Enterococcus spp. en el entorno quesero y los genes de resistencia antibiótica asociados, así como la relación epidemiológica de E. faecalis y E. faecium desde el enfoque Una Sola Salud.
Resumen (otro idioma):
Los enterococos forman parte de la microbiota comensal de animales y humanos, y están presentes en múltiples nichos ecológicos incluido los alimentos. Su capacidad para adaptarse a situaciones adversas y para intercambiar material genético con otras bacterias, lo convierte en un indicador idóneo de la transferencia horizontal de material genético. Por ello, los estudios dirigidos a la tipificación y caracterización de Enterococcus spp., permiten determinar las rutas de transmisión de RAM entre el sector animal, medio ambiente y humano.
El objetivo de este trabajo ha sido evaluar la cadena alimentaria como entorno favorable para la transmisión y diseminación de resistencias antimicrobianas y exposición a genes de resistencia.
En primer lugar, se ha caracterizado fenotípica y genotípicamente la resistencia antimicrobiana en 80 aislados de Enterococcus spp. obtenidos del proceso de elaboración de queso artesano de leche cruda de oveja, en dos centros de producción diferentes. En general, E. faecalis y E. faecium fueron las especies más prevalentes; también se identificaron E. hirae, E. casseliflavus y E. durans. La técnica de difusión en disco ha permitido detectar resistencia al menos a un antibiótico de los 16 analizados en el 72 % de los aislados, con tasas altas de resistencia a tetraciclinas, macrólidos y aminoglucósidos; además, el 29 % de los aislados han presentado multirresistencia.
Mediante RT PCR se han analizado 19 genes de resistencia e identificado 10 genes diferentes en ADN plasmídico, relacionándose en la mayoría de los casos el patrón fenotípico con un mecanismo de resistencia adquirido. Los genes tet M, erm B y ant (6)-Ia, han estado presentes en el 50 %, 30 % y 25 % de los aislados, respectivamente. E. faecalis ha sido la especie que ha presentado las mayores tasas de RAM tanto a nivel fenotípico como genotípico, seguido de E. hirae y E. casseliflavus,mientras que E. faecium ha presentado únicamente resistencia in vitro a quinupristina/dalfopristina y ausencia de genes de RAM, y E. durans ha sido sensible a todos los antibióticos tanto a nivel fenotípico como genotípico.
En segundo lugar, la caracterización molecular ha permitido estudiar la dinámica poblacional de enterococos identificándose un total de 55 genotipos mediante RAPD PCR. Así mismo, mediante PFGE se han identificado 12 pulsotipos de E. faecalis y 6 de E. faecium, confirmando el importante papel que juegan los enterococos en el proceso de elaboración del queso. Los resultados han demostrado la utilidad de la técnica RAPD PCR como alternativa rápida, sencilla y económica para la caracterización molecular de Enterococcus spp. cuando se aplica bajo condiciones previamente optimizadas y controladas.
Por último, mediante el análisis MLST se ha estudiado la relación filogenética de los aislados de E. faecalis y E. faecium de origen lácteo con los de origen humano, animal y ambiental a nivel mundial.
E. faecalis ha presentado una elevada diversidad genética representada por 10 secuencias tipo, dos de las cuales (ST1056 y ST1057) se han identificado por primera vez a nivel mundial depositándose en la base de datos MLST. Los clones detectados se han asociado mayoritariamente al ambiente hospitalario (ST25, ST133, ST55, ST40, ST16, ST206, ST538), agrupándose 3 de ellos (ST538, ST16 y ST40) en complejos clonales de alto riesgo epidemiológico (CC2, CC16 y CC40, respectivamente). Los aislados clasificados en estos complejos clonales presentaron altas tasas de resistencia, codificada por los determinantes genéticos erm B (CC2), tet M y ant(6)-Ia (CC40) y lnu B, tet M, erm B, cat A, catp C221, ant(6)-Ia y aac(6¿)-Ie-aph(2¿)-Ia (CC16).
La tipificación por MLST permitió identificar un total de 5 secuencias tipo de E. faecium: ST47, ST1491, ST286, ST1853 y ST1854, las dos últimas detectadas por primera vez a nivel mundial. Los resultados han demostrado una escasa relación filogenética entre los aislados obtenidos del proceso de elaboración de queso y de otros orígenes epidemiológicos depositados en la base de datos MLST.
Por último, el análisis del proceso de elaboración de queso ha revelado que la leche cruda de oveja y el queso curado constituyen una vía de exposición a bacterias resistentes y genes de resistencia con implicaciones para la seguridad alimentaria y la salud pública.
En conclusión, el estudio molecular llevado a cabo en este trabajo ha permitido conocer la dinámica poblacional de Enterococcus spp. en el entorno quesero y los genes de resistencia antibiótica asociados, así como la relación epidemiológica de E. faecalis y E. faecium desde el enfoque Una Sola Salud.
Resumen (otro idioma):
Pal. clave: microbiología de alimentos ; biología molecular ; salud pública ; tecnología de los alimentos
Titulación: Programa de Doctorado en Calidad, Seguridad y Tecnología de los Alimentos
Plan(es): Plan 486
Área de conocimiento: Ciencias
Nota: Presentado: 01 12 2022
Nota: Tesis-Univ. Zaragoza, , 2022
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Registro creado el 2024-12-16, última modificación el 2024-12-16
