Construcción y evaluación de vectores pBiFC para el estudio de las interacciones entre las proteínas Bim, PUMA y Noxa y otras proteínas de la familia Bcl-2 y estudio del potencial terapéutico de compuestos miméticos de BH3

Benedí Visiedo, Andrea
Marzo Rubio, Isabel (dir.) ; Gonzalo Martínez, Oscar (dir.)

Universidad de Zaragoza, CIEN, 2017
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Área de Biología Celular

Máster en Biología Molecular y Celular

Resumen: Las interacciones que se producen entre las proteínas de la familia Bcl-2 desempeñan un papel importante en la regulación de la ruta intrínseca de la apoptosis. A pesar de que todavía existe cierta polémica respecto al mecanismo exacto mediante el cual se regula la activación de las proteínas proapoptóticas multidominio Bax y Bak, se sabe que las proteínas pro-apoptóticas “solo-BH3” son esenciales en este proceso. Según los resultados obtenidos en este trabajo, las proteínas Bim, PUMA y Noxa son capaces de formar complejos tanto con las proteínas anti-apoptóticas Bcl-2, Bcl-XL y Mcl-1 como con Bax/Bak en la mitocondria, aunque Bim y PUMA parecen unirse con mayor afinidad a las proteínas anti-apoptóticas, particularmente a Bcl-2, mientras que Noxa muestra una especificidad similar por Bcl-2 y Bak. Además, el presente trabajo demuestra que estas interacciones se modifican en presencia de los nuevos miméticos BH3 A-1155463 y A-1210477, inhibidores selectivos de Bcl-XL y Mcl-1, respectivamente. Por otra parte, también se ha evaluado el potencial terapéutico de los miméticos BH3 ABT-737, ABT-199, A-1155463 y A-1210477 como agentes únicos en la línea celular A549, observándose un efecto pro-apoptótico moderado en el caso de ABT-737, una eficacia mínima de ABT-199 y A-1210477 y una acción intermedia de A-1155463. No obstante, se observó un efecto sinérgico al combinar A-1155463 con dos inhibidores de la familia Aurora (barasertib y alisertib) y con dos agentes anti-microtúbulos clásicos (vincristina y docetaxel), todos ellos englobados dentro de la categoría de fármacos antimitóticos; en cambio, A-1210477 no mostraba sinergia al combinarse con ninguno de estos compuestos. Además, se evaluó el potencial terapéutico de A-1155463 y A-1210477 en las líneas celulares de mieloma múltiple RPMI 8226, U266 y MM.1S y, de acuerdo con nuestros resultados, el primer compuesto muestra un efecto citotóxico mayor en las células RPMI 8226 y MM.1S, mientras que las células U266 son más sensibles al segundo.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master