TAZ-TFM-2013-1161


Estudio preliminar sobre la influencia de los genes cspA, cpxA, hscA, recA y clpB en la resistencia al calor de Escherichia coli

Cantán Arnal, Elisa
García Gonzalo, Diego (dir.) ; Pagán Tomás, Rafael (dir.)

Universidad de Zaragoza, VET, 2013
Producción Animal y Ciencia de los Alimentos department, Tecnología de Alimentos area

Máster Universitario en Iniciación a la Investigación en Ciencia y Tecnología de los Alimentos

Abstract: En esta investigación se ha realizado un estudio preliminar sobre la influencia de los genes cspA, cpxA, hscA, recA y clpB en la resistencia al calor de Escherichia coli, mediante la comparación de la resistencia de la cepa parental BW25113 y las cepas mutantes obtenidas de la colección Keio. Posteriormente, y con objeto de poder confirmar en un futuro los resultados obtenidos en una cepa de referencia (E. coli MG1655), se han creado mutantes deletéreos en esta cepa mediante el uso de herramientas moleculares. Como resultado del estudio preliminar, se ha podido establecer relación directa entre la deleción de los genes cpxA, recA y clpB y una mayor sensibilidad a los tratamientos térmicos. Concretamente, este estudio ha revelado una disminución de la resistencia intrínseca de la membrana citoplasmática como consecuencia de la deleción de los genes cpxA, recA y clpB, por lo que la expresión de estos genes podría estar relacionada con la estabilización de esta envoltura celular frente a los tratamientos térmicos, y en el caso de los genes cpxA y clpB con los mecanismos de reparación de los daños ocasionados sobre dicha envoltura celular. Del mismo modo, el estudio ha revelado una disminución de la resistencia intrínseca de la membrana externa como consecuencia de la deleción del gen clpB. Así, se han seleccionado los genes clpB y cpxA, y mediante la técnica de mutagénesis dirigida mediante transducción con bacteriófagos P1 se ha introducido la mutación para los genes clpB y cpxA a partir de las cepas de la colección Keio, E. coli JW2573 y JW3525, respectivamente, en la cepa de referencia de E. coli MG1655. Posteriormente, se ha eliminado el marcador de resistencia antibiótica mediante una FLP recombinasa, lo que ha permitido que la cepa mutante construida tuviese una secuencia genómica lo más parecida posible a la secuencia original. Una vez obtenidos estos mutantes en E. coli MG1655 será posible evitar cualquier posible interferencia del gen de resistencia antibiótica, y de este modo, verificar, en un estudio posterior, el posible papel de los genes seleccionados sobre la termorresistencia de E. coli.

Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master

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